氨基酸和神經(jīng)遞質(zhì)與注意缺陷多動障礙的相關(guān)性研究.pdf

1、注意缺陷多動障礙(ADHD)是兒童期尤其是學(xué)齡期兒童最常見的行為障礙。ADHD的病因是多方面的，包括生理、心理、社會等因素。本實驗從神經(jīng)生化的角度來尋找病因線索，重點研究單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和氨基酸在ADHD發(fā)病中的作用。 本實驗在以下三個方面進(jìn)行了研究：1)建立多種氨基酸同時測定的方法(包括已有和未見文獻(xiàn)報道的可能與ADHD相關(guān)的氨基酸：2)建立與ADHD相關(guān)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物的靈敏準(zhǔn)確的測定方法；3)研究這些神經(jīng)遞質(zhì)及氨基

2、酸在ADHD中的改變，.探討ADHD可能的病理生化機(jī)制。論文主要工作如下： 一、建立柱前衍生化-高效液相色譜法測定氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的方法及其評價所研究的幾種氨基酸由于不含有芳香壞等生色團(tuán)，無法直接檢測，因此選用柱前衍生試劑-丹酰氯，先將氨基酸衍生為具有較強(qiáng)紫外和熒光吸收的衍生物，通過測定其衍生產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度對氨基酸進(jìn)行定量分析。 本實驗建立了一種同時快速測定谷氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸、甘氨酸、牛磺酸5種氨基酸類神經(jīng)遞

3、質(zhì)的高效液相色譜法。采用KromasilC<,18>(4.6×250mm,5um)為色譜柱，丹酰氯為柱前衍生試劑，以曲唑酮為內(nèi)標(biāo)，0.1mol/L醋酸鈉緩沖液：甲醇=58∶42，14mmol/L庚烷磺酸鈉溶液為流動相，流速為1ml/min，熒光檢測器檢測，等度洗脫。在1～200mg/L范圍內(nèi)，各組分線性關(guān)系良好(r=0.999)，每種氨基酸的回收率為80.1﹪～92.9﹪。本方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于腦組織中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的測定。

4、 二、建立高效液相色譜法測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的方法及其評價根據(jù)實驗的需要，分別建立了高效液相色譜-熒光檢測法(HPLC-Flu)和丹酰氯柱前衍生化-高效液相色譜法-紫外(Dns-HPLC-UV)測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物的方法。 HPLC-Flu法是以KromasilC<,18>(4.6×250mm，5μm)為色譜柱，0.1mol/L的醋酸鈉溶液：甲醇(體積比10∶90)為流動相，用冰醋酸調(diào)pH為5.5，其中含0.2mmo

5、l/L乙二胺四乙酸二鈉。流速1.5ml/min，進(jìn)樣量20μl，柱溫為室溫，激發(fā)波長286nm，發(fā)射波長318nm。各待測物的檢出限可達(dá)1.0pmol～3.0pmol，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD﹪)分別為2.3﹪，2.6﹪，3.1﹪、2.9﹪、2.7﹪、1.4﹪和2.9﹪(n=5)，在2～300pmol范圍內(nèi)，各組分線性關(guān)系良好(r=0.999)。本法快速、簡便、準(zhǔn)確，可用于大鼠腦組織和紋狀體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的測定。 Dns-HPLC-UV法

6、是以島津ODS(150mm×4.6mm，5μm)為色譜柱；流動相為0.1mol/L醋酸鋅：乙腈：四氫呋喃=62：35：3，用三氟乙酸調(diào)至pH2.5，流速在0～10min為1.0ml/min，10～35min為20ml/min，紫外檢測波長286nm，進(jìn)樣量20μl，室溫。同時詳細(xì)考察了衍生條件，在丹酰氯濃度為10mg/ml，水浴溫度為50℃，緩沖液pH值為11時，反應(yīng)最完全。本法可用于單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和氨基酸的同時衍生測定。 三、

7、注意缺陷多動障礙模型大鼠神經(jīng)遞質(zhì)及氨基酸變化的初步研究為研究ADt{D模型大鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和氨基酸的代謝變化及探討其在ADI-ID發(fā)病中的作用，采用高效液相色譜法測定10只自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和20只正常SD大鼠血清和腦組織中氨基酸和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量并進(jìn)行比較。結(jié)果ADHD組腦組織多巴胺水平高于正常對照組，去甲腎上腺素水平則低于正常對照組，并且差異有統(tǒng)計學(xué)意義：腦中興奮性氨基酸類含量高于正常對照組，而抑制性氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含

8、量低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；ADHD組血清谷氨酸、酪氨酸、絲氨酸低于正常對照組，蘇氨酸高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；ADHD組腦組織中精氨酸和谷氨酰胺低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。得出結(jié)論如下：1)根據(jù)所查的文獻(xiàn)，首次發(fā)現(xiàn)精氨酸和谷氨酰胺在．ADHD模型動物腦組織中存在差異，推測它們在．ADHD的病理過程中可能具有一定作用，主要機(jī)制也是通過影響氨基酸遞質(zhì)而發(fā)揮作用的，這為ADHD發(fā)病機(jī)制的研究提供了新的病因線索：2)同時測定