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文檔簡介
1、本文分兩部分,第一部分:細胞因子活化的供體淋巴細胞輸注的療效觀察。
目的:觀察細胞因子活化的供體淋巴細胞輸注(新型DLI)治療異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)術后急性白血病復發(fā)患者的療效。
方法:回顧性分析16例allo-HSCT術后復發(fā)并接受新型DLI或常規(guī)DLI治療的急性白血病患者的臨床資料,用多參數(shù)微小殘留病檢測系統(tǒng),包括骨髓形態(tài)學、流式細胞術(FCM)、實時定量PCR(RQ-PCR)、復合擴
2、增熒光標記短串聯(lián)重復序列(STR)-PCR結合毛細管電泳、R顯帶或熒光原位雜交(FISH)綜合評價比較新型DLI和常規(guī)DLI療效差異。新型DLI采用干擾素-α聯(lián)合供體淋巴細胞輸注,常規(guī)DLI為直接輸注單采的供體淋巴細胞。
結果:新型DLI組8例,治療時疾病狀態(tài)包括血液學復發(fā)(HR)7例,復發(fā)傾向1例,常規(guī)DLI組8例,治療時疾病狀態(tài)包括HR7例,分子學復發(fā)1例。新型DLI組與常規(guī)DLI組的誘導緩解率分別為62.5%vs25
3、%,對HR的誘導緩解率分別為57.14%vs14.28%,誘導緩解中位時間分別為7天vs23天。GVHD發(fā)生率分別為62.5%vs25%,全血細胞減少發(fā)生率分別為62.5%vs75%。1年總生存率分別為50%vs12.5%。
結論:單中心小樣本臨床分析結果顯示,新型DLI治療移植后復發(fā)急性白血病的誘導緩解率為62.5%,誘導緩解中位時間7天,持續(xù)緩解時間長,是治療移植后復發(fā)的有效手段,未來有必要進一步探索個體化治療策略,針
4、對患者疾病狀態(tài)、復發(fā)時間及移植類型設計新型DLI的治療劑量,以最大程度產(chǎn)生GVL效應,降低重癥GVHD的發(fā)生,延長患者的無病生存。
第二部分:細胞因子活化的供體淋巴細胞輸注作用機制的初步研究。
目的:初步探索細胞因子活化的供體淋巴細胞輸注(新型DLI)可能的作用機制。
方法:1.血細胞單采法收集經(jīng)G-CSF動員后的外周血干細胞,F(xiàn)icoll密度梯度離心法分離得到單個核細胞(MNC),用不同濃度的
5、IFN-α(500U/ml、1000U/ml、2000U/ml、4000U/m1)活化的MNC與SHI-1細胞系共孵育不同時間(2、3和7天),MTT法檢測IFN-α活化的MNC對SHI-1細胞系的殺傷效應;2.利用SHI-1細胞系分組實驗,摸索達到最佳細胞毒效應的時間和細胞因子濃度節(jié)點,應用FCM檢測IFN-α對淋巴細胞和樹突狀細胞(DC)免疫表型的影響;3.收集4例移植后復發(fā)患者接受新型DLI治療前后的外周血,F(xiàn)CM檢測治療前后的外
6、周血中淋巴細胞亞群及淋巴細胞表面活化標志的變化。
結果:1-IFN-α能增強MNC對SHI-1的殺傷效率,高濃度IFN-α(4000U/ml)在作用時間為2天和3天時,即能顯著增強MNC對SHI-1的殺傷效應,當作用時間延長至第7天時,常規(guī)濃度(1000U/ml)亦能顯著增強MNC對SHI-1的殺傷效率;2.達到最佳細胞毒效應的IFN-α濃度為4000U/ml,作用時間為3天,經(jīng)過IFN-α培養(yǎng)3d的MNC,CD3+CD4
7、+細胞比例升高,淋巴細胞活化標志CD69表達升高,DC表面成熟標志不同程度升高;3.治療有效的2例患者在治療前后CD3+細胞、CD3+CD4+細胞、CD3+CD8+細胞均維持在穩(wěn)定水平,而治療無效的2例患者均出現(xiàn)不同程度的下降。治療有效的患者均出現(xiàn)淋巴細胞活化標志HLA-DR表達升高。4例患者治療前后NK細胞、CD4+CD25+細胞、Tγδ細胞均未見明顯變化。
結論:1.體外細胞系實驗證實,經(jīng)過7天的共孵育,高濃度和低濃度
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