

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、結(jié)直腸癌是危害人類生命健康的惡性腫瘤之一。最新全球癌癥統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,2012年度全球結(jié)直腸癌新發(fā)病例140萬(wàn)左右,死亡病例693900,其中發(fā)病率在男性中排名第三,女性中排名第二,死亡率在男性中排名第四,女性排名第三。在我國(guó)隨著人民生活水平的提高,誘發(fā)結(jié)直腸癌的高危因素也在同步廣泛流行,包括人口老齡化的發(fā)生、不健康的飲食方式、肥胖、吸煙等,因而近年來(lái)結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率呈逐年上升。而腫瘤的轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌致死的主要原因,也是影響患者預(yù)
2、后的重要因素。
為了探究結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制,我們課題組為此展開了系列研究。MC3是我們實(shí)驗(yàn)室前期自主建立的一株結(jié)腸癌特異單抗,我們鑒定出其識(shí)別的抗原為Txl-2,后期發(fā)現(xiàn)Txl-2的剪接體Txl-2b與小G蛋白R(shí)an相互作用,顯著促進(jìn)結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)移。在此基礎(chǔ)上,我們對(duì)Ran做了功能學(xué)驗(yàn)證和機(jī)制探索。結(jié)果顯示Ran在結(jié)直腸癌組織中、胃癌組織中、胰腺癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織,并且其高表達(dá)與腫瘤的分期及轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。在結(jié)直腸
3、癌細(xì)胞和胰腺癌細(xì)胞中,干擾Ran的表達(dá)可引起細(xì)胞體內(nèi)體外增殖能力減弱。在胰腺癌細(xì)胞,Ran表達(dá)的下調(diào)可引起細(xì)胞凋亡增加,細(xì)胞遷移及侵襲能力明顯下降,研究還發(fā)現(xiàn)其調(diào)控機(jī)制與細(xì)胞周期相關(guān)蛋白及存活素Survivin表達(dá)下調(diào),凋亡蛋白cleaved Caspase-3表達(dá)上調(diào)有關(guān)。而其促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制則與雄激素受體Androgen Receptor、趨化因子CXCR4可能相關(guān)。研究至此,尚無(wú)直接證據(jù)證明Ran可以促進(jìn)結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移,同時(shí)R
4、an在結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制仍不清楚。
【目的】
1.檢測(cè)并分析Ran在結(jié)直腸癌中病理組織及細(xì)胞系中的表達(dá)與轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
2.研究Ran對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系遷移侵襲能力的影響。
3.探索Ran促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
【方法】
1.小G蛋白R(shí)an在組織與細(xì)胞中的表達(dá)檢測(cè):
?。?)免疫組織化學(xué)檢測(cè) Ran在結(jié)直腸癌原發(fā)灶和配對(duì)陽(yáng)性淋巴結(jié)中的表達(dá),分析Ran的表
5、達(dá)強(qiáng)度與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
?。?)Western blot檢測(cè)Ran在永生化正常腸上皮細(xì)胞HIEC、結(jié)直腸癌細(xì)胞系SW480、SW620、HCT116、Caco-2、HT-29、LoVo核蛋白中的表達(dá)情況。
?。?)免疫熒光檢測(cè)Ran在結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480、SW620的亞細(xì)胞定位情況及熒光表達(dá)強(qiáng)弱情況。
2.構(gòu)建Ran的功能獲得、功能缺失細(xì)胞模型:
?。?)將Ran特異性O(shè)ligo siRNA轉(zhuǎn)染
6、入結(jié)直腸癌細(xì)胞,在蛋白水平驗(yàn)證通過(guò) Western blot驗(yàn)證siRNA的干擾效果。
?。?)將最有效的的siRNA包裝構(gòu)建成慢病毒,穩(wěn)定下調(diào)Ran的表達(dá),并通過(guò)Western blot和熒光檢測(cè)進(jìn)行驗(yàn)證。
?。?)構(gòu)建并轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)Ran的慢病毒,并通過(guò)Western blot進(jìn)行過(guò)表達(dá)驗(yàn)證。
3. Ran對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響:
?。?)體外實(shí)驗(yàn)通過(guò)Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)觀察Ra
7、n的功能獲得和功能缺失細(xì)胞模型遷移和侵襲能力的變化。
?。?)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)通過(guò)裸鼠尾靜脈轉(zhuǎn)移觀察Ran功能獲得和功能缺失細(xì)胞模型在體內(nèi)侵襲能力的變化。
4. Ran調(diào)控結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究
(1)利用Nanostring檢測(cè)技術(shù)探索Ran下游的分子表達(dá)變化及可能的信號(hào)通路。
?。?)利用高通量表達(dá)譜芯片探索Ran下游的分子表達(dá)變化及可能的信號(hào)通路。
?。?)通過(guò)RNAi技術(shù)、Western
8、blot檢測(cè)雄激素受體AR、LIN28B與Ran的表達(dá)失調(diào)的關(guān)系,通過(guò)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證AR、LIN28B在結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移能力中的影響。
【結(jié)果】
1.在34例結(jié)直腸癌組織及其配對(duì)的陽(yáng)性淋巴結(jié)標(biāo)本中,免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示Ran在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移灶(陽(yáng)性淋巴結(jié))中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于結(jié)直腸癌原發(fā)灶中的表達(dá),P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.結(jié)直腸癌細(xì)胞系及永生化正常腸上皮細(xì)胞的核蛋白中Ran表達(dá)存在
9、差異,在人永生化正常腸上皮細(xì)胞HIEC表達(dá)極少,在高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SW620、HCT116、Caco-2中Ran的表達(dá)明顯高于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SW480、HT-29。
3.免疫熒光結(jié)果顯示,Ran主要定位于細(xì)胞核中,且高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 SW620和SW480中Ran的表達(dá)存在差異。
4.合成的Ran特異的Oligo siRNA經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染和驗(yàn)證,si-1干擾效果最好,經(jīng)過(guò)慢病毒包裝后,在高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系HCT116中進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染,經(jīng)
10、過(guò)嘌呤霉素篩選后,通過(guò) Western blot和熒光顯影檢測(cè),成功構(gòu)建了Ran的表達(dá)下調(diào)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系HCT116-siRan及對(duì)照HCT116-siNC。
5.通過(guò)對(duì)低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SW480進(jìn)行過(guò)表達(dá)慢病毒的轉(zhuǎn)染及續(xù)嘌呤霉素篩選,成功構(gòu)建了過(guò)表達(dá)Ran的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系SW480-Ran及對(duì)照SW480-NC。
6.體外實(shí)驗(yàn)Transwell結(jié)果顯示細(xì)胞系HCT116-siRan的侵襲遷移能力較對(duì)照細(xì)胞系明顯減弱,細(xì)胞系S
11、W480-Ran的侵襲遷移能力較對(duì)照組明顯增強(qiáng)。該結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有意義。
7.體內(nèi)裸鼠尾靜脈轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞系HCT116-siRan裸鼠肝臟中形成的轉(zhuǎn)移瘤較對(duì)照組明顯減少,細(xì)胞系SW480-Ran在肝臟中形成的轉(zhuǎn)移灶則明顯多于對(duì)照組,且HCT116-siRAN組裸鼠的生存期較對(duì)照組延長(zhǎng),體重動(dòng)態(tài)變化在第18天出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
8.細(xì)胞系Sw480-Ran中AR與LIN28B的表達(dá)均發(fā)生了上調(diào),而在Caco-2細(xì)
12、胞中,干擾Ran的表達(dá)后AR、LIN28B的表達(dá)發(fā)生了下降。Ran、AR、LIN28B均主要表達(dá)在細(xì)胞核中,在Ran的表達(dá)下調(diào)后,AR、LIN28B的熒光表達(dá)也相應(yīng)的減弱。且干擾AR、LIN28B表達(dá)后可以減弱結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移能力。
9.通過(guò)送檢Nanostring以及高通量的表達(dá)譜芯片,對(duì)Ran的下游分子機(jī)制進(jìn)行探索,篩選出一批差異表達(dá)的基因,我們后續(xù)將利用這些大數(shù)據(jù)對(duì)Ran下游的信號(hào)通路及分子事件進(jìn)行生物信息學(xué)的分析,明
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- β-catenin在結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其相關(guān)分子機(jī)制研究.pdf
- DAB2IP在結(jié)直腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制.pdf
- LRG1在結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其調(diào)控機(jī)制研究.pdf
- PAK1、Snail在結(jié)直腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用.pdf
- PAK1、HIF-1α在結(jié)直腸癌侵襲與轉(zhuǎn)移中的作用.pdf
- MicroRNA-106a在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制.pdf
- SIRT1在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用和機(jī)制研究.pdf
- RhoGDI2在結(jié)直腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及EMT中的作用研究.pdf
- MicroRNA-301a在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制.pdf
- CD73在結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)分子機(jī)制研究.pdf
- Ras相關(guān)核蛋白R(shí)an促進(jìn)結(jié)直腸癌惡性表型的機(jī)制研究.pdf
- Sestrin 2在結(jié)直腸癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究.pdf
- ALDH1A1在膠質(zhì)瘤侵襲和結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用和機(jī)制.pdf
- SLIT2在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及其相關(guān)機(jī)制研究.pdf
- 肌細(xì)胞增強(qiáng)因子MEF2D在結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用和分子機(jī)制研究.pdf
- PGRN在結(jié)直腸癌中的作用及分子機(jī)制研究.pdf
- 細(xì)胞角蛋白在結(jié)直腸癌浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移的臨床研究.pdf
- DLC2表達(dá)調(diào)控結(jié)直腸癌發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后的作用機(jī)制研究.pdf
- 結(jié)直腸癌肺轉(zhuǎn)移
- Galectin-9在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其在腫瘤轉(zhuǎn)移中作用機(jī)制的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論