2型脯氨酸羥化酶在結(jié)直腸癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是全球范圍內(nèi)最常見的惡性上皮性腫瘤之一,發(fā)病率呈逐年上升趨勢,其5年生存率約為60％。其發(fā)生不良預(yù)后的重要原因可能包括腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移。所以研究腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的有關(guān)機制對于提高結(jié)直腸癌患者的治療效果和改善結(jié)直腸癌患者的預(yù)后具有重要的臨床價值。
　　低氧或缺氧局部微環(huán)境是實體性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的非常重要的特點。它能導(dǎo)致腫瘤細胞出現(xiàn)許多生物學(xué)特性改變,而上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變(epithelial-mesenchymal transit

2、ion, EMT)是其非常重要的表型改變。以往有關(guān) EMT的研究主要是在缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factor, HIF)等關(guān)鍵性因子所介導(dǎo)的多種基因的轉(zhuǎn)錄激活等下游環(huán)節(jié),本身并不能直接感受細胞內(nèi)外氧分壓的變化。而脯氨酸羥化酶(PHD2)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種重要氧感受器,可直接調(diào)控腫瘤細胞對氧濃度變化的反應(yīng)能力,是真正直接能夠感受氧分壓改變的蛋白分子。目前已經(jīng)證實哺乳動物細胞中有三種同工物——PHD1、PHD2和P

3、HD3,后又發(fā)現(xiàn)第4種類似物-PHD4,不過PHD4僅在HIF-1a過表達時才發(fā)揮作用,且有研究發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)腫瘤細胞系和腫瘤組織中PHD2表達出現(xiàn)下調(diào)或缺失,目前尚未見其與結(jié)直腸癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系的相關(guān)報道。
　　本課題擬通過研究PHD2在結(jié)直腸癌組織和結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移灶組織中的表達情況及與臨床病理特征和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系,并通過體外實驗進一步明確其與腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性,為進一步研究抗腫瘤治療提供新的研究方向。
　　目的:

4、檢測PHD2在結(jié)直腸癌組織及轉(zhuǎn)移灶組織中的表達,探討其臨床意義,明確其與結(jié)直腸癌細胞遷移侵襲的相互關(guān)系。
　　方法:采用結(jié)直腸癌及對應(yīng)轉(zhuǎn)移灶病理組織標本及結(jié)直腸癌細胞株(SW-620、SW-480、LS174T、SW-480mock和SW-480over)為研究對象。
　　分二部分進行:
　　第一部分采用免疫組化染色方法,探討PHD2蛋白在149結(jié)直腸癌組織標本和50例結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移灶組織(淋巴結(jié)和肝)中的表達情況及與臨床

5、病理特征和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相互關(guān)系。
　　第二部分采用 Western blot和慢病毒轉(zhuǎn)染方法,檢測結(jié)直腸癌細胞株 SW-620、SW-480、LS174T、SW-480mock和SW-480over中PHD2蛋白表達,主要通過transwell遷移侵襲實驗觀察其與腫瘤細胞遷移侵襲能力的關(guān)系。
　　結(jié)果
　　1. PHD2在結(jié)直腸癌組織中表達下調(diào)或缺失,而在癌旁腸粘膜組織中高表達,并與與腫瘤的臨床分期(P<0.001)

6、,腫瘤組織的分化(P<0.001)及是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移灶中表達低于原發(fā)灶相應(yīng)組織(P<0.05)。
　　2. PHD2在SW-480,SW-620和LS174T三種結(jié)直腸癌細胞株中的表達與其遷移侵襲能力成反比,即PHD2蛋白表達量越低,其遷移侵襲能力越強,且在通過慢病毒過表達PHD2后,細胞遷移侵襲能力會出現(xiàn)顯著性降低。
　　結(jié)論
　　1、PHD2在結(jié)直腸癌中的表達差異顯著,與其臨床分期和是否轉(zhuǎn)移密切等相