短蛸氨基多糖的提取分離及生物活性的初步研究.pdf

1、氨基多糖作為一類重要的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，在抗腫瘤、抗衰老和免疫調(diào)節(jié)等方面具有良好的應(yīng)用前景。本論文以湛江產(chǎn)鮮短蛸為原料，對(duì)其做出營養(yǎng)評(píng)價(jià)，通過蛋白酶酶解提取得到肌肉、消化腺、生殖腺三組織的氨基粗多糖，初步探討了三種粗多糖的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化活性等。 本論文的試驗(yàn)內(nèi)容與結(jié)果： 1.對(duì)肌肉、消化腺和生殖腺的主要營養(yǎng)成分、氨基酸及肌肉的脂肪酸組成進(jìn)行分析及營養(yǎng)評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，肌肉中粗蛋白質(zhì)含量最高達(dá)80.8﹪，總糖含量在三組織中大

2、小順序?yàn)橄伲旧诚伲炯∪猓竞吭?.03﹪～6.98﹪之間，灰分含量非常接近，在5.38﹪～6.01﹪之間；肌肉、消化腺和生殖腺蛋白質(zhì)營養(yǎng)價(jià)分別為100、78和100；肌肉中共檢測(cè)到20種脂肪酸，其中PUFA含量為40.89﹪。 2.用蛋白酶提取氨基多糖條件的確定：分別用3種蛋白酶酶解肌肉，確定所用酶量為木瓜蛋白酶1.2﹪、枯草桿菌中性蛋白酶1.4﹪、胰酶0.7﹪；試驗(yàn)6組雙酶組合酶解肌肉，確定最佳酶組合條件為木瓜蛋白酶

3、1.2﹪和枯草桿菌中性蛋白酶1.4﹪，50℃，pH7.0水解4小時(shí)。 3.采用提取肌肉氨基粗多糖(OOG1)的條件來提取消化腺(OOG2)和生殖腺多糖(OOG3)。三種多糖的提取率分別為0.5﹪、5﹪和5.5﹪，氨基多糖的含量分別為粗品的28.87﹪、23.41﹪和24.87﹪。 4.采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)三種多糖對(duì)K562細(xì)胞的抑制作用。結(jié)果顯示OOG1、OOG2和OOG3均對(duì)細(xì)胞具有一定的生長抑制作用。 5.采用

4、MTT法檢測(cè)三種粗多糖單獨(dú)對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，OOG1和OOG3在0.5mg/mL時(shí)對(duì)靜止脾臟淋巴細(xì)胞有明顯的促進(jìn)作用。 6.采用MTT法檢測(cè)三種粗多糖協(xié)同有絲分裂原ConA對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，粗多糖協(xié)同ConA對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖不明顯。 7.檢測(cè)三種粗多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果顯示，各多糖均有一定吞噬作用，OOG1、OOG2、OOG3分別在濃度為0.5mg/m

5、L、0.25mg/mL、0.5mg/mL達(dá)到最好效果。 8.采用免疫器官法檢測(cè)三種粗多糖對(duì)正常和免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。腹腔注射CTX造成免疫抑制模型，灌胃OOG連續(xù)7天，測(cè)定胸腺和脾臟重量，計(jì)算臟體指數(shù)。OOG3能恢復(fù)免疫抑制組小鼠胸腺指數(shù)；OOG2和OOG3脾臟指數(shù)明顯高于免疫抑制組。各多糖組跟正常組相比，均能使胸腺指數(shù)顯著增加，對(duì)于脾臟指數(shù)影響效果不明顯。 9.采用試劑盒進(jìn)行羥自由基體系的清除試驗(yàn)。結(jié)果表明，一

6、定濃度的OOG1和OOG2對(duì)羥自由基有一定的抑制效果，OOG1的最佳抑制效果為251.87U/mL。 10.采用試劑盒進(jìn)行抗超氧陰離子自由基試驗(yàn)。結(jié)果表明，OOG2和OOG3最佳抑制超氧陰離子效果分別達(dá)到197.26U/L和106.85U/L，并且1.07mg/mLOOG2對(duì)超氧陰離子抑制率達(dá)到16.24﹪，比標(biāo)準(zhǔn)品高3.91﹪。 結(jié)論： (1)短蛸是一種高蛋白低脂肪，蛋白質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值高，有益健康脂肪酸含量較高的海