人源M2三聯(lián)體靶抗原的克隆表達及其在原發(fā)性膽汁性肝硬化中的應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究設計克隆表達了一抗原蛋白三聯(lián)體,命名為BPO,它包含了M2抗體識別的人源BCOADC-E2、PDC-E2、OGDC-E2的抗原表位片斷.該研究工作共分三個部分：一、PBC特異性M2抗體靶抗原及其三聯(lián)體的克隆表達與鑒定;從人外周血單個核細胞（PBMC）中抽提細胞總RNA,逆轉錄合成cDNA,以此作為模板,PCR法擴增PDC-E2內側硫辛酰區(qū)和部分外側硫辛酰區(qū),BCOADC-E2和OGDC-E2的硫辛酰區(qū).擴增產物用相應限制性內切酶酶

2、切后純化,定向克隆入表達載體pQE-30.對插入載體的目的基因進行測序.二、PBC免疫學診斷方法的建立 我們將N端融合有六個組氨酸殘基的重組蛋白,用Ni-NTA親和層析柱,在變性條件下進行純化,然后透析除去變性劑,以使重組蛋白復性.利用純化得到的BPO,建立了Westen-blot法與ELISA法.ELISA法的的批內、批間變異系數(shù)均小于10﹪.85例陰性對照血清的OD值為0.073±0.046.陽性臨界值定為0.303（陰性平均OD值

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