原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床與基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的： 通過觀察PBC患者外周血清ET的水平以及應(yīng)用熊去氧膽酸治療后血清中ET的變化，并與肝功能指標(biāo)相關(guān)性的分析，尋找ET與PBC疾病進(jìn)展的關(guān)系。通過ET作用于外周血單核細(xì)胞引起其分泌的細(xì)胞因子的變化，探討ET在PBC發(fā)病機(jī)制中可能存在的作用。 方法： 采集24例PBC患者外周血血清，應(yīng)用ELISA法測量其ET的濃度。采集16例PBC患者，8例干燥綜合征患者，12例健康成人的新鮮抗凝靜脈血，分離單個(gè)核細(xì)胞，而后置

2、于RPMI1640中培養(yǎng)，予1×10-<'7>M ET-1刺激后，收集上清，應(yīng)用ELISA法測量上清液TNF-alpha以及IL-6的濃度。裂解PBMC進(jìn)行RT-PCR檢測。先提取總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以此為模板，以beta-actin為內(nèi)參，加入特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增后產(chǎn)物電泳后測量目的基因以及beta-actin相應(yīng)條帶的光密度，計(jì)算兩者光密度的比值，對(duì)標(biāo)本中目的基因的表達(dá)水平進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果：

3、24例PBC病人的ET水平為6.00±2.81pg/ml,健康對(duì)照平均ET水平為2.3±3.42pg/ml，PBC病人血清ET濃度明顯高于正常人血清ET濃度，兩者有顯著性差異(P<0.05)。 Child A級(jí)PBC患者外周血血清ET濃度為5.60±2.85pg/ml,ChildB級(jí)PBC患者外周血血清ET濃度為6.94±2.64pg/ml,但兩者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。血清中ET的升高水平與患者的肝功能生化指標(biāo)無明顯

4、的相關(guān)性。UDCA治療前患者ET水平7.51±1.63pg/ml，治療后ET水平為6.23±2.72pg/ml。LIDCA治療前后患者ET水平有明顯下降，在90％可信區(qū)間內(nèi)且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.084)。ET-1刺激后PBC病人以及健康對(duì)照TNF-α的產(chǎn)生有明顯增加(P<0.05)。無ET-1刺激時(shí)，病人及正常人外周血單核細(xì)胞也能夠分泌IL-6，ET-1刺激后PBC病人以及干燥綜合征患者IL-的產(chǎn)生有明顯下降，但均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5、而正常人外周血單核細(xì)胞經(jīng)過ET-1刺激后分泌的IL-6有所上升，但是也沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。無論刺激前后，PBC患者與正常人分泌的細(xì)胞因子濃度均無明顯差異。RT-PCR證實(shí)，ET-1刺激外周血單核細(xì)胞引起TNF-α mRNA的表達(dá)增加。 結(jié)論： PBC患者外周血清中ET的濃度較正常人明顯增加，但在Child A級(jí)于B級(jí)患者之間ET的水平無明顯差異。經(jīng)過熊去氧膽酸治療后，PBC患者血清中ET水平明顯下降。ET-1作用于人外周