檢測MUC1mRNA診斷肺癌縱隔淋巴結(jié)隱匿轉(zhuǎn)移.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文檢測MUC1mRNA診斷肺癌縱隔淋巴結(jié)隱匿轉(zhuǎn)移姓名：王洲申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：殷洪年2000.12.1★博士學(xué)位論文《檢測MuclmRNA診斷肺癌縱隔淋巴結(jié)隱匿性轉(zhuǎn)移中文摘要人5例，5枚肺局部淋巴結(jié)；陽性對照組為NscLc病人5例，5枚經(jīng)常規(guī)病理檢查證實有轉(zhuǎn)移癌存在的縱隔淋巴結(jié)。將摘除之淋巴結(jié)表面的脂肪組織剝離，然后用生理鹽水徹底沖洗，沿長軸于中間切開，每切取一份標(biāo)本更換一次器械，以避免不同組織

2、細(xì)胞間的交叉污染產(chǎn)生假陽性結(jié)果，標(biāo)本標(biāo)號后一半送常規(guī)病理檢查，另一半用錫箔紙包裹標(biāo)號后浸入液氮中速凍1分鐘，然后置于負(fù)70度冰箱內(nèi)保存待用。按TRJzol試劑說明書提取每例標(biāo)本的總RNA，紫外分光光度儀測量、判定所提取RNA的純度，要求0D：。。／OD28。17。按RNA—PCR試劑盒說明書將每例標(biāo)本的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。在下列反應(yīng)體系中PcR：3uI標(biāo)本cDNA，lOBuffer4u1，Mucl上、下游引物各15l，0一acti

3、n上、下游引物各05ul，TaqDNA聚合酶025ul，滅菌蒸餾水3475uI。PCR條件：94℃2分鐘，94℃1分鐘，50℃1分鐘，72。C15分鐘，共30次循環(huán)。將PcR產(chǎn)物5ul在2％瓊脂糖凝膠版上電泳，EB染色，應(yīng)用GIs數(shù)碼凝膠圖象分析系統(tǒng)記錄結(jié)果。在287bp處顯帶者為MuclmRNA陽性。應(yīng)用自動測序儀對兩例PcR陽性產(chǎn)物進(jìn)行測序。最后對PcR陽性的另外半枚淋巴結(jié)蠟塊再進(jìn)行連續(xù)病理切片，HE染色病理檢查。結(jié)果陰性對照組的5

4、枚淋巴結(jié)均無Mucl基因mRNA的表達(dá)，陽性對照組的5枚縱隔淋巴結(jié)均檢測到了MuCl基因mRNA的表達(dá)。這表明RT蛇R濁診斷NscLc淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有較高的敏感性及特異性，可以用于肺癌縱隔淋巴結(jié)隱匿轉(zhuǎn)移的診斷。實驗組5例病人中的6枚縱隔淋巴結(jié)檢測到MuCl基因mRNA的表達(dá)，從而診斷為隱匿轉(zhuǎn)移，占受檢標(biāo)本的77。病人的TNM分期分別由I期和IIa期上調(diào)為IIla期。2例MuClmRNA陽性的PcR產(chǎn)物測序結(jié)果顯示，287bp的cDNA片段