檢測MUC1mRNA診斷肺癌縱隔淋巴結隱匿轉移.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文檢測MUC1mRNA診斷肺癌縱隔淋巴結隱匿轉移姓名：王洲申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：殷洪年2000.12.1★博士學位論文《檢測MuclmRNA診斷肺癌縱隔淋巴結隱匿性轉移中文摘要人5例，5枚肺局部淋巴結；陽性對照組為NscLc病人5例，5枚經常規(guī)病理檢查證實有轉移癌存在的縱隔淋巴結。將摘除之淋巴結表面的脂肪組織剝離，然后用生理鹽水徹底沖洗，沿長軸于中間切開，每切取一份標本更換一次器械，以避免不同組織

2、細胞間的交叉污染產生假陽性結果，標本標號后一半送常規(guī)病理檢查，另一半用錫箔紙包裹標號后浸入液氮中速凍1分鐘，然后置于負70度冰箱內保存待用。按TRJzol試劑說明書提取每例標本的總RNA，紫外分光光度儀測量、判定所提取RNA的純度，要求0D：。。／OD28。17。按RNA—PCR試劑盒說明書將每例標本的總RNA反轉錄成cDNA。在下列反應體系中PcR：3uI標本cDNA，lOBuffer4u1，Mucl上、下游引物各15l，0一acti

3、n上、下游引物各05ul，TaqDNA聚合酶025ul，滅菌蒸餾水3475uI。PCR條件：94℃2分鐘，94℃1分鐘，50℃1分鐘，72。C15分鐘，共30次循環(huán)。將PcR產物5ul在2％瓊脂糖凝膠版上電泳，EB染色，應用GIs數碼凝膠圖象分析系統記錄結果。在287bp處顯帶者為MuclmRNA陽性。應用自動測序儀對兩例PcR陽性產物進行測序。最后對PcR陽性的另外半枚淋巴結蠟塊再進行連續(xù)病理切片，HE染色病理檢查。結果陰性對照組的5

4、枚淋巴結均無Mucl基因mRNA的表達，陽性對照組的5枚縱隔淋巴結均檢測到了MuCl基因mRNA的表達。這表明RT蛇R濁診斷NscLc淋巴結轉移具有較高的敏感性及特異性，可以用于肺癌縱隔淋巴結隱匿轉移的診斷。實驗組5例病人中的6枚縱隔淋巴結檢測到MuCl基因mRNA的表達，從而診斷為隱匿轉移，占受檢標本的77。病人的TNM分期分別由I期和IIa期上調為IIla期。2例MuClmRNA陽性的PcR產物測序結果顯示，287bp的cDNA片段