E2F1在胃癌中的表達(dá)及E2F decoy DNA對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo).pdf

1、目的:(1)探討轉(zhuǎn)錄因子E2F1基因的表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為及與生存素（survivin）和p53表達(dá)的相關(guān)性。
　　 (2)利用E2F decoy DNA抑制胃癌SGC7901細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡。
　　 方法:
　　 (1)應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)61例胃癌組織中E2F1、Survivin和P53的表達(dá)，并以20例胃低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變?yōu)閷?duì)照。
　　 (2)用脂質(zhì)體LipofectaminTM2000將人

2、工合成E2F decoy DNA轉(zhuǎn)入胃癌SGC7901細(xì)胞，倒置相差顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率。
　　 結(jié)果:
　　 (1)E2F1、Survivin和P53在胃癌組織中的陽(yáng)性率分別為75.4%、85.2%和68.9%，顯著高于低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織中的30.0%、40.0%和15.0%，差異有顯著性（p<0.05）。
　　 (2)E2F1的表達(dá)在胃癌分化程度、浸潤(rùn)

3、深度、TNM分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中差異無(wú)顯著性（p>0.05）。Survivin和P53的表達(dá)在胃癌TNM分期和有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中均有顯著性差異（p<0.05），并且Survivin的表達(dá)在胃癌有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有顯著性（p<0.05）。
　　 (3)胃癌中E2F1的表達(dá)強(qiáng)度分別與Survivin和P53的表達(dá)強(qiáng)度呈等級(jí)正相關(guān)（rs1=0.519,p1<0.01；rs2=0.602，p2<0.01）。
　　 (4

4、)胃癌SGC7901細(xì)胞轉(zhuǎn)染E2Fdecoy DNA后，分時(shí)段觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)逐漸縮小，胞漿出現(xiàn)空泡，核膜逐漸皺縮，約在48小時(shí)可見(jiàn)凋亡小體。
　　 (5)MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率發(fā)現(xiàn)，E2F decoy DNA組SGC7901細(xì)胞存活率低，與Control decoy DNA組和空白對(duì)照組相比有顯著差異(p<0.05)，Control decoy DNA組和空白對(duì)照組的細(xì)胞存活率無(wú)顯著差異(p>0.05)，E2F de

5、coy DNA組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后24h存活率為65.3％，轉(zhuǎn)染后48h存活率為48.3％，轉(zhuǎn)染后72h存活率為48.5%。
　　 (6)流式細(xì)胞術(shù)（FCM）觀(guān)察細(xì)胞凋亡率，轉(zhuǎn)染E2F decoy DNA后的SGC7901細(xì)胞24小時(shí)凋亡率為14.75±2.26%、死亡細(xì)胞率2.43±0.30%，48小時(shí)細(xì)胞凋亡率為22.15±3.29%、死亡細(xì)胞率20.58±3.47%，與空白對(duì)照組和Control decoy DNA組相比差異有顯著

6、性(p<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)E2F1可能作用于胃癌發(fā)生的早期階段，Survivin和P53可能作用于胃癌發(fā)生的晚期階段。
　　 (2)E2F1、Survivin和P53在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起協(xié)同作用。
　　 (3)轉(zhuǎn)錄因子E2Fdecoy DNA轉(zhuǎn)染后，能成功誘導(dǎo)胃癌SGC7901細(xì)胞凋亡。
　　 (4)轉(zhuǎn)錄因子decoy策略，通過(guò)基因功能缺失，有可能為胃癌的基因治療開(kāi)辟新