萊菔硫烷誘導人胃癌(SGC7901)裸鼠移植瘤細胞凋亡機制的研究.pdf

1、目的：萊菔硫烷（sulforaphane，SFN）是主要從十字花科蔬菜中提取的一種具有較強抗癌作用的植物化學活性物質。本實驗通過建立胃癌細胞裸鼠移植瘤模型，觀察SFN對人胃癌SGC7901細胞裸鼠移植瘤增殖和凋亡的影響，探討其誘導凋亡的分子作用機制，為胃癌拓展新的植物化學藥物治療提供實驗依據(jù)。
　　 方法：BALB/C裸鼠20只，雄性，6周齡，16-20g，建立人胃癌SGC7901細胞裸鼠移植瘤模型，采用隨機數(shù)字法隨機分為對照組

2、、SFN低、中、高劑量4組，待腫瘤直徑長至約4mm大小時，采用腹腔注射給藥的方法，分別注射生理鹽水、SFN1mg/kg、3mg/kg.10mg/kg，隔日給藥1次，共6次。治療后第16天以頸椎脫臼法處死裸鼠，測量各組移植瘤直徑，計算瘤體積，快速剝離瘤體組織并稱重。取移植瘤組織，制作石蠟切片，進行HE染色，采用光鏡、透射電鏡和TUJNEL法分別檢測移植瘤細胞增殖和凋亡情況。分別運用半定量RT-PCR法和免疫組織化學法檢測移植瘤細胞凋亡相關

3、因子Bc1-2、BaxmRNA和蛋白表達的變化。
　　 結果：1、1～10mg/kg濃度范圍的SFN對人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤細胞有明顯抑制作用，且隨著SFN藥物劑量的增加，抑瘤率明顯增強，呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。對照組、SFN低、中、高劑量治療組抑瘤率分別為0、35.10％、56.98%、77.08%。2、透射電鏡觀察到在SFN作用后，移植瘤細胞呈現(xiàn)胞質濃縮，染色質濃縮邊集，核膜破裂，而胞膜完整，可見典型的凋亡小體。3、T

4、UNEL檢測細胞凋亡，對照組、SFN低、中、高劑量治療組細胞凋亡陽性表達率分別為11%、21%、29%、35%，隨著SFN劑量的增加，凋亡率明顯增加，呈現(xiàn)一定的劑量依賴效應，各治療組與對照組相比，P均＜0.05。4、半定量RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)隨著SFN劑量的增加，Bc1-2的mRNA條帶強度遞減，而Bax的mRNA條帶強度隨劑量增加而遞增。5、免疫細胞化學結果顯示SFN作用后，SGC7901裸鼠移植瘤細胞Bax蛋白陽性表達率明顯增高，且

5、隨著SFN劑量的增加，蛋白陽性表達率進一步增強；而Bc1-2蛋白表達減少，且隨著SFN劑量增加而蛋白陽性表達率進一步下降。
　　 結論
　　 1、SFN可抑制人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤細胞的增殖、抑制腫瘤新生血管生成和誘導胃癌細胞凋亡。
　　 2、SFN以劑量依賴的方式誘導人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤細胞凋亡。SFN可能通過抑制Bc1-2蛋白的表達，增加Bax蛋白的表達及活化，從而通過線粒體內源性途徑誘導凋