萊菔硫烷誘導(dǎo)人胃癌(SGC7901)裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：萊菔硫烷（sulforaphane，SFN）是主要從十字花科蔬菜中提取的一種具有較強(qiáng)抗癌作用的植物化學(xué)活性物質(zhì)。本實驗通過建立胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，觀察SFN對人胃癌SGC7901細(xì)胞裸鼠移植瘤增殖和凋亡的影響，探討其誘導(dǎo)凋亡的分子作用機(jī)制，為胃癌拓展新的植物化學(xué)藥物治療提供實驗依據(jù)。
　　 方法：BALB/C裸鼠20只，雄性，6周齡，16-20g，建立人胃癌SGC7901細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，采用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為對照組

2、、SFN低、中、高劑量4組，待腫瘤直徑長至約4mm大小時，采用腹腔注射給藥的方法，分別注射生理鹽水、SFN1mg/kg、3mg/kg.10mg/kg，隔日給藥1次，共6次。治療后第16天以頸椎脫臼法處死裸鼠，測量各組移植瘤直徑，計算瘤體積，快速剝離瘤體組織并稱重。取移植瘤組織，制作石蠟切片，進(jìn)行HE染色，采用光鏡、透射電鏡和TUJNEL法分別檢測移植瘤細(xì)胞增殖和凋亡情況。分別運(yùn)用半定量RT-PCR法和免疫組織化學(xué)法檢測移植瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)

3、因子Bc1-2、BaxmRNA和蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：1、1～10mg/kg濃度范圍的SFN對人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤細(xì)胞有明顯抑制作用，且隨著SFN藥物劑量的增加，抑瘤率明顯增強(qiáng)，呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。對照組、SFN低、中、高劑量治療組抑瘤率分別為0、35.10％、56.98%、77.08%。2、透射電鏡觀察到在SFN作用后，移植瘤細(xì)胞呈現(xiàn)胞質(zhì)濃縮，染色質(zhì)濃縮邊集，核膜破裂，而胞膜完整，可見典型的凋亡小體。3、T

4、UNEL檢測細(xì)胞凋亡，對照組、SFN低、中、高劑量治療組細(xì)胞凋亡陽性表達(dá)率分別為11%、21%、29%、35%，隨著SFN劑量的增加，凋亡率明顯增加，呈現(xiàn)一定的劑量依賴效應(yīng)，各治療組與對照組相比，P均＜0.05。4、半定量RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)隨著SFN劑量的增加，Bc1-2的mRNA條帶強(qiáng)度遞減，而Bax的mRNA條帶強(qiáng)度隨劑量增加而遞增。5、免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示SFN作用后，SGC7901裸鼠移植瘤細(xì)胞Bax蛋白陽性表達(dá)率明顯增高，且

5、隨著SFN劑量的增加，蛋白陽性表達(dá)率進(jìn)一步增強(qiáng)；而Bc1-2蛋白表達(dá)減少，且隨著SFN劑量增加而蛋白陽性表達(dá)率進(jìn)一步下降。
　　 結(jié)論
　　 1、SFN可抑制人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤細(xì)胞的增殖、抑制腫瘤新生血管生成和誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。
　　 2、SFN以劑量依賴的方式誘導(dǎo)人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡。SFN可能通過抑制Bc1-2蛋白的表達(dá)，增加Bax蛋白的表達(dá)及活化，從而通過線粒體內(nèi)源性途徑誘導(dǎo)凋