p16真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文p16真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因的研究姓名：張守純申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：王太一20040401實(shí)驗(yàn)結(jié)果重組p C R @ 3 ．1 ／p 1 6 表達(dá)載體構(gòu)建成功，轉(zhuǎn)染p 1 6 基因的N I H 3 T 3 細(xì)胞中可以檢測(cè)列p 1 6 m R N A 的表達(dá)，且細(xì)胞生長(zhǎng)速度受到明顯的抑制討 論大多數(shù)正常組織中，p 1 6 的正常表達(dá)水平極低。小鼠中只有一些成年組織用R T —P C R 才能

2、檢測(cè)到其表達(dá)。細(xì)胞倍增次數(shù)的增加和癌基因的導(dǎo)人，可激活正常細(xì)胞中p 1 6 的表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)細(xì)胞老化。1 9 9 5 年，L u k a s 等將p 1 6 蛋白顯微注射人正常細(xì)胞系I M R - 9 0 ，隨注射劑量增大，細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯于G ，期，而注入腫瘤來源的變異p 1 6 蛋白不能抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。將人正常細(xì)胞系換為p 1 6 ““基因變異的瘤細(xì)胞系，亦出現(xiàn)相同的結(jié)果，但注入p 1 6 蛋白對(duì)R b 缺陷的癌細(xì)胞無抑制作

3、用。K o h 向N I H 3 T 3 細(xì)胞顯微注射p 1 6 ““的表達(dá)質(zhì)粒，亦觀察到細(xì)胞周期阻滯現(xiàn)象，但用C D K 4 或C D K 6 表達(dá)質(zhì)粒與p 1 6 ““表達(dá)質(zhì)粒共同注射，未出現(xiàn)明顯的阻滯現(xiàn)象。本研究中，轉(zhuǎn)染p C R @ 3 ．1 ／p 1 6 的N I H 3 T 3 細(xì)胞的生長(zhǎng)受到顯著抑制與K o h 的結(jié)果一致。I N K 4 a ／A R F 基因位點(diǎn)通過基因重疊編碼兩種不同的蛋白質(zhì)，二者都參與衰老及腫瘤抑制

4、過程，這兩個(gè)基因有各自獨(dú)立的啟動(dòng)子，產(chǎn)生不同的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，其中，外顯子l d 、2 、3 編碼p 1 6 ?“，外顯子1 B 、2 、3 編碼p 1 9 ”’( 人類為p 1 4 “’) ，盡管具有共同的外顯子2 和3 ，但是，它們有不同的閱讀框架，因此，這兩種蛋白質(zhì)的氨基酸序列不具有同源性。敲除外顯子1 1 3 的小鼠與敲除外顯子2 和3 的小鼠在腫瘤易患性方面有驚人的相似之處，這說明在小鼠腫瘤抑制方面，p 1 9 ””具有更大的相關(guān)性