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1、R-Spondin家族蛋白（RSpos）是一類在脊椎動(dòng)物胚胎及個(gè)體中普遍存在的分泌型糖蛋白。RSpo蛋白最主要的功能是作為Wnt/β-caternin經(jīng)典信號(hào)通路的激活物，參與調(diào)控一些依賴于該信號(hào)通路的下游基因表達(dá)。
在某些由Wnt通路受阻引起的癌癥中，R-Spondin作為經(jīng)典Wnt信號(hào)途經(jīng)的激活劑，有望成為有效的治療成分，可作為針對(duì)癌癥的基因治療候選藥物。
本研究以腺相關(guān)病毒載體系統(tǒng)AAV Helper-
2、free系統(tǒng)為基礎(chǔ)，擬構(gòu)建攜帶R-Spondin家族三個(gè)基因（R-Spondin1、RPE-Spondin、R-Spondin3）的重組腺相關(guān)病毒載體，包裝出含有目標(biāo)基因的重組腺相關(guān)病毒，并通過(guò)病毒介導(dǎo)目標(biāo)基因在宿主細(xì)胞里進(jìn)行表達(dá)。
通過(guò)PCR方法，將綠色熒光蛋白（EGFP）、myc抗原、6×His多標(biāo)簽標(biāo)記的R-Spondin融合基因擴(kuò)增出來(lái)，將融合基因擴(kuò)增產(chǎn)物插入到AAV表達(dá)質(zhì)粒pAAV-MCS多克隆位點(diǎn)中，構(gòu)建出重組
3、腺相關(guān)病毒載體。重組質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒pAAV-RC和輔助質(zhì)粒pHelper磷酸鈣法共轉(zhuǎn)染AAV-293細(xì)胞制備重組病毒。重組病毒感染AAV-HT1080細(xì)胞，熒光顯微鏡以及Western blot檢測(cè)病毒介導(dǎo)的目標(biāo)基因表達(dá)，流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定病毒滴度。
重組病毒載體pAAV-RSpol-EGFP、pAAV-RPESpo-EGFP、pAAV-RSpo3一EGFP構(gòu)建成功，并成功包裝出具有侵染性的重組腺相關(guān)病毒rAAV-RSpo1
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