膠原支架(CS)分別聯(lián)合bFGF、MSCs在大鼠脊髓損傷中的應(yīng)用.pdf

1、第一部分：膠原支架（CS）交聯(lián)bFGF對大鼠脊髓半切損傷的修復(fù)作用
　　目的：本實驗通過建立大鼠脊髓半側(cè)切損傷模型，評價膠原支架（CS）與成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)交聯(lián)對脊髓損傷的修復(fù)作用。
　　方法：
　　一、建立大鼠左側(cè)T9脊髓半橫斷損傷模型：103只健康雄性6周齡SD大鼠隨機(jī)分為3組：
　　1，假手術(shù)組；
　　2，CS移植組；
　　3，CS+bFGF移植組。
　　二、術(shù)后每周進(jìn)行一次B

2、BB評分，分別在術(shù)后4周和8周施行足跡分析、組織學(xué)檢查和以及免疫組化(anti-NF、anti-GFAP)等檢查。
　　結(jié)果：
　　1.根據(jù)排除標(biāo)準(zhǔn)，有7只大鼠因不完全半橫斷而被淘汰，最后留96只大鼠。生存曲線分析發(fā)現(xiàn)CS/bFGF組的生存率遠(yuǎn)高于對照組與CS組。
　　2.在8周末，CS/bFGF組與CS組的左下肢BBB評分明顯高于對照組。然而，各組右側(cè)肢體的BBB評分沒有明顯差異。
　　3.術(shù)后4周和8周施行足

3、跡分析顯示，CS/bFGF組的肢體間協(xié)調(diào)功能比CS組與對照組明顯改善。
　　4.4周和8周免疫組化分析可見：CS/bFGF組anti-NF染色密度明顯均比CS組與對照組高，而GFAP染色密度最低，表明損傷周圍有較多的神經(jīng)纖維再生，對膠質(zhì)瘢痕有抑制作用。
　　結(jié)論：CS/bFGF植入大鼠脊髓半切損傷模型能夠促進(jìn)軸突的再生，促進(jìn)肢體功能的恢復(fù)。同時也提高了大鼠的生存率。
　　第二部分：膠原支架（CS）負(fù)載MSCs對大鼠脊髓

4、半切損傷模型修復(fù)作用
　　一、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的制備與鑒定
　　目的：通過體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)，鑒定表面標(biāo)記物進(jìn)行，為修復(fù)脊髓損傷提供骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源。
　　方法：無菌條件下收集幼年SD大鼠骨髓，收集單個核細(xì)胞，培養(yǎng)于10%胎牛血清培養(yǎng)液中。使用流式細(xì)胞儀鑒定CD29,CD90,CD34和CD45表面標(biāo)志。以后細(xì)胞按常規(guī)方法傳代、凍存，培養(yǎng)三代后的細(xì)胞用于實驗研究。

5、　　結(jié)果：原代接種1d即可見較多細(xì)胞貼壁。培養(yǎng)至7-9d左右細(xì)胞匯合達(dá)到80％左右，細(xì)胞呈極性排列，集落呈漩渦狀。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測，MSCs均一地表達(dá)CD29、CD90；而CD34、CD45陰性。
　　結(jié)論：成功分離和培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　二、膠原支架（CS）負(fù)載MSCs修復(fù)大鼠脊髓半切損傷
　　目的：通過建立大鼠脊髓半側(cè)切損傷模型，分析和評價膠原支架負(fù)載MSCs修復(fù)脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)的效果。
　　

6、方法：
　　一、建立大鼠T9左側(cè)脊髓半橫斷損傷模型：105只健康雄性6周齡SD大鼠隨機(jī)分為4組：
　　1，假手術(shù)組(n=20)；
　　2，對照組（n=30）；
　　3，CS移植組（n=31）；
　　4，CS+MSC移植組（n=24）。
　　二、術(shù)后每周一次BBB評分，分別術(shù)后4周和8周行足跡分析、組織學(xué)檢查和以及免疫組化(anti-NF、anti-GFAP、anti-NSE)等檢查。
　　結(jié)果：

7、
　　一、10只老鼠因不完全半橫斷而被淘汰（對照組4只，CS組3只，CS/MSC組3只），最后留95只老鼠。
　　二、CS/MSC組的左后肢功能的恢復(fù)較其他組快。在8周末，CS/MSC組與CS組的BBB評分明顯高于對照組。
　　三、足跡分析顯示，CS/MSC組的肢體間協(xié)調(diào)功能比CS組與對照組明顯改善
　　四、4周和8周免疫組化分析可見：CS/MSC組anti-NF染色密度明顯均比CS組與對照組高，而GFAP染色密