版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、 目的：(1)構(gòu)建凋亡素基因原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)、提純凋亡素融合蛋白,為進(jìn)一步制備其單克隆抗體提供物質(zhì)基礎(chǔ)；(2)構(gòu)建帶真核核糖體結(jié)合位點(diǎn)(Kozak序列)的凋亡素基因真核表達(dá)載體,提高凋亡素基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)效率。
方法：以pcDNA-VP3質(zhì)粒為模板,通過一次PCR方法,擴(kuò)增出不帶真核核糖體結(jié)合位點(diǎn)的凋亡素VP3基因；通過兩次PCR方法,擴(kuò)增出帶有真核核糖體結(jié)合位點(diǎn)的凋亡素VP3基因。分別將其克隆到原核表達(dá)載體pE
2、T-DsbA及真核表達(dá)載體pRevTRE的多克隆位點(diǎn),構(gòu)建成凋亡素基因原核表達(dá)載體pET-DsbA-VP3及真核表達(dá)載體pRevTRE-VP3,進(jìn)行雙酶切及測序鑒定。進(jìn)一步將正確克隆有凋亡素基因的原核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌E.coliBL21(DE3)plysS中,以異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),固化Ni離子金屬鏊合純化帶6X組氨酸標(biāo)簽的凋亡素融合蛋白,聚丙
3、烯酰胺凝膠電泳分析目的蛋白。
結(jié)果：凋亡素基因原核及真核表達(dá)載體測序鑒定結(jié)果表明,本研究合成的凋亡素基因與Noteborn等報(bào)告的凋亡素基因序列一致,同源性為100%,并在真核表達(dá)載體凋亡素基因起始密碼前添加了Kozak序列。轉(zhuǎn)化的E.coliBL21(DE3)plysS經(jīng)IPTG誘導(dǎo),固化Ni離子金屬鏊合親和層析純化蛋白,聚丙烯酰胺凝膠電泳獲得分子量為38.3KD的目的蛋白條帶。
結(jié)論：(1)構(gòu)建的凋亡素基因原核表
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 大熊貓γ-干擾素基因克隆、原核表達(dá)及真核表達(dá)載體構(gòu)建.pdf
- 含報(bào)告基因的凋亡素基因真核表達(dá)載體構(gòu)建研究.pdf
- 人α-乳清蛋白基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及原核表達(dá).pdf
- 人肝再生增強(qiáng)因子基因的克隆、真核表達(dá)載體構(gòu)建及原核表達(dá).pdf
- IBRV gC和gD基因的原核表達(dá)與真核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf
- 50019.人trail基因cdna的克隆及真核和原核表達(dá)載體的構(gòu)建
- 人泛素基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及鑒定.pdf
- HaSNPV幾丁質(zhì)酶基因原核與真核的構(gòu)建及表達(dá)研究.pdf
- 人noggin基因克隆及真核表達(dá)載體構(gòu)建.pdf
- 淋球菌外膜蛋白PⅠB基因原核及真核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及初步鑒定.pdf
- 豬輪狀病毒NSP4基因原核與真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)研究.pdf
- 人源胸腺素原-白介素融合蛋白基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf
- 人rhoC基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá).pdf
- 腫瘤候選基因PRR11原核、真核表達(dá)載體構(gòu)建、細(xì)胞定位及功能的初步研究.pdf
- 豬囊尾蚴cYI基因的原核載體構(gòu)建及表達(dá).pdf
- GSDML基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及功能的初步研究.pdf
- BC022687基因原核及真核重組質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá).pdf
- PHA基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及功能分析.pdf
- 玉米抗蟲蛋白基因原核表達(dá)載體構(gòu)建及活性研究.pdf
- 豬Ghrelin基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá).pdf
評論
0/150
提交評論