特異性抗SSA-Ro單鏈可變區(qū)(scFv)噬菌體抗體的篩選、鑒定及其基因序列分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:噬菌體抗體庫技術(shù)是近10余年來發(fā)展起來的用于制備抗體的重要手段,它將特異性結(jié)合和高效篩選有機(jī)結(jié)合,大大減少了獲得目的抗體的工作量;同時(shí)該技術(shù)將抗體的表型與基因型聯(lián)系在一起,在獲得目的抗體的同時(shí)也可得到其基因序列.該科已經(jīng)用此技術(shù)構(gòu)建了一個(gè)人源抗SSA/Ro噬菌體單鏈抗體庫,該實(shí)驗(yàn)將先對其進(jìn)行鑒定,再用純化SSA/Ro抗原進(jìn)行篩選,建立一個(gè)更特異的抗SSA/Ro次級抗體庫,從中挑選出單克隆抗體并分析其基因序列,為抗SSA/Ro單克隆

2、抗體進(jìn)一步應(yīng)用于臨床奠定基礎(chǔ).方法:將凍存的抗體庫菌種TG1復(fù)蘇,用輔助噬菌體M13K07超感染制備噬菌體抗體庫.隨機(jī)挑選10個(gè)單菌落,用PCR的方法檢測含外源插入片斷的比例,對其中4個(gè)含有正確長度插入片段克隆的外源基因進(jìn)行測序并與Gene-bank及V BASE數(shù)據(jù)庫中胚系抗體基因序列比較了解插入片段的性質(zhì).用一個(gè)識別4個(gè)堿基的限制性內(nèi)切酶MSPⅠ消化8個(gè)正確長度插入片段的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,了解未富集前的噬菌體抗體庫的多樣性.以純化的S

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