抗hCG單鏈?zhǔn)删w抗體庫(kù)的構(gòu)建及篩選技術(shù)平臺(tái)的初步探索.pdf

1、一、本研究應(yīng)用基因工程方法,構(gòu)建了pPIC9k-β CG表達(dá)載體,經(jīng)電轉(zhuǎn)化畢氏酵母細(xì)胞,篩選出分泌性表達(dá)β hCG蛋白的陽(yáng)性克隆株.此外,根據(jù)hCG的分子結(jié)構(gòu)和理化特性,采用分子篩和離子交換層析等生化技術(shù),獲得較高純度的hCG全分子蛋白.兩種方法獲得的hCG全分子及亞單位經(jīng)鑒定證實(shí)其分子量和抗原性正確,為后續(xù)的噬菌體抗體文庫(kù)的篩選提供了抗原保證.二、應(yīng)用分子生物學(xué)方法,構(gòu)建了一個(gè)庫(kù)容為10<'5>的免疫噬菌體抗體庫(kù).經(jīng)過(guò)純化的hCG抗原

2、三輪淘篩后,不結(jié)合的噬菌體抗體庫(kù)經(jīng)單抗捕獲的酵母表達(dá)βhCG再次篩選.在富集的文庫(kù)中,隨機(jī)挑選96個(gè)克隆制備噬菌體抗體,經(jīng)雙抗體夾心法進(jìn)一步鑒定,得到18株與hCG和βhCG分子都結(jié)合的噬菌體抗體.對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行了可溶性表達(dá),用雙抗體夾心法鑒定可溶性單鏈抗體的結(jié)合活性.并對(duì)其中4株陽(yáng)性克隆進(jìn)行了測(cè)序分析.三、綜合應(yīng)用生物信息學(xué)方法,對(duì)獲得的基因序列進(jìn)行分析.結(jié)果表明確為抗體基因.同時(shí)確定了其框架區(qū),互補(bǔ)決定區(qū)的序列.之后又通過(guò)同源建模,