抗hCG單鏈噬菌體抗體庫的構建及篩選技術平臺的初步探索.pdf

1、一、本研究應用基因工程方法,構建了pPIC9k-β CG表達載體,經(jīng)電轉化畢氏酵母細胞,篩選出分泌性表達β hCG蛋白的陽性克隆株.此外,根據(jù)hCG的分子結構和理化特性,采用分子篩和離子交換層析等生化技術,獲得較高純度的hCG全分子蛋白.兩種方法獲得的hCG全分子及亞單位經(jīng)鑒定證實其分子量和抗原性正確,為后續(xù)的噬菌體抗體文庫的篩選提供了抗原保證.二、應用分子生物學方法,構建了一個庫容為10<'5>的免疫噬菌體抗體庫.經(jīng)過純化的hCG抗原

2、三輪淘篩后,不結合的噬菌體抗體庫經(jīng)單抗捕獲的酵母表達βhCG再次篩選.在富集的文庫中,隨機挑選96個克隆制備噬菌體抗體,經(jīng)雙抗體夾心法進一步鑒定,得到18株與hCG和βhCG分子都結合的噬菌體抗體.對陽性克隆進行了可溶性表達,用雙抗體夾心法鑒定可溶性單鏈抗體的結合活性.并對其中4株陽性克隆進行了測序分析.三、綜合應用生物信息學方法,對獲得的基因序列進行分析.結果表明確為抗體基因.同時確定了其框架區(qū),互補決定區(qū)的序列.之后又通過同源建模,