紫草素聯(lián)合低劑量阿糖胞苷對AML細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:研究紫草素協(xié)同低劑量阿糖胞苷抑制急性髓細胞白血病細胞株 HL-60和U937細胞增殖和誘導細胞凋亡的作用及其初步機制。
　　方法：CKK8法檢測不同濃度的阿糖胞苷和紫草素對兩種細胞的增殖抑制作用；Annexin V-FITC/PI雙標記法檢測低濃度藥物單獨以及聯(lián)合作用對細胞凋亡的影響；用caspase-3蛋白活性檢測試劑盒和Western blot檢測細胞凋亡中caspase-3的活化及其底物PARP的裂解情況； PI染色法

2、檢測細胞死亡比例和阿糖胞苷和紫草素對細胞周期的阻滯作用；Carboxy-H2DCFD染色法和JC-1染色法檢測藥物及各種抗氧化劑對細胞活性氧水平和線粒體膜電位的影響；侵襲實驗觀察低劑量阿糖胞苷和紫草素對細胞侵襲能力的影響，Western blot、流式細胞術和實時熒光定量PCR三種方式檢測低劑量阿糖胞苷對CD147基因和蛋白表達的影響；Western blot檢測阿糖胞苷和紫草素對MAPK通路的影響。
　　結果：阿糖胞苷和紫草素對

3、HL-60和U937細胞增殖都出現(xiàn)濃度和時間依賴性抑制，從而計算出紫草素和阿糖胞苷抑制半數(shù)HL-60和U937增殖的藥物濃度（IC50），確定實驗中所用藥物劑量不會誘導細胞死亡。紫草素可以濃度依賴性地促進細胞凋亡、降低細胞線粒體膜電位和提高細胞內(nèi)活性氧分子水平，將HL-60細胞阻滯在細胞周期G1期，U937細胞阻滯在G2期。低濃度的阿糖胞苷（100nM）和紫草素（0.5M）聯(lián)合作用時，相比較于單獨藥物處理組，細胞凋亡顯著增加（P<0.0

4、5)，活性氧相對水平顯著升高（P<0.05），細胞線粒體膜電位出現(xiàn)了顯著下降（P<0.05)。低濃度的阿糖胞苷可以通過誘導CD147的表達促進細胞侵襲，紫草素可以抑制CD147的表達從而抑制細胞的侵襲能力，同時，低濃度的阿糖胞苷和紫草素可以協(xié)同活化JNK和p38途徑，抑制ERK通路的活性。
　　結論：紫草素聯(lián)合低濃度的阿糖胞苷可以協(xié)同使HL-60和U937細胞發(fā)生增殖抑制、周期抑制和凋亡，其機制可能與ROS的大量產(chǎn)生引起的損傷導致