HMGA1基因啟動子克隆及活性區(qū)域的分析.pdf

1、目的:本課題研究的目的在于獲得HMGA1基因啟動子序列,并對其活性序列進行分析,明確HMGA1基因啟動子在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-12)和人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中的活性中心序列;同時觀察HMGA1對高糖誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:采用 PCR技術(shù)克隆 HMGA1基因啟動子序列,構(gòu)建一系列不同長度的HMGA1啟動子熒光素酶報告基因載體,分別轉(zhuǎn)染至HUVEC-12和MCF-7細(xì)胞中,以熒光素酶報告系統(tǒng)分析鑒

2、定HMGA1基因啟動子的主要活性區(qū)域。構(gòu)建HMGA1表達質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)染至HUVEC-12細(xì)胞,利用流式細(xì)胞術(shù)觀察 HMGA1對高糖誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果:1)成功構(gòu)建了HMGA1基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游1367、1024、598及256bp片段的雙熒光素酶報告基因質(zhì)粒載體,發(fā)現(xiàn) HMGA1基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游256bp序列在MCF-7細(xì)胞顯示出較高啟動子活性,而在HUVEC-12細(xì)胞中其轉(zhuǎn)錄起始位點上游598