低分子肝素對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞在抗子宮內(nèi)膜抗體環(huán)境中增殖與凋亡能力調(diào)節(jié)作用的探討.pdf

1、目的：
　　 探討體外培養(yǎng)的人早孕絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞，在含有抗子宮內(nèi)膜抗體(EmAb)血清環(huán)境中，低分子肝素(LMWH)對(duì)其細(xì)胞增殖能力和凋亡情況的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：
　　 抽取在我院門診就診的EmAb陽(yáng)性而其它與自然流產(chǎn)相關(guān)的免疫性抗體均陰性的病人肘靜脈血5ml，各相關(guān)免疫性抗體均陰性的正常育齡婦女肘靜脈血5ml，離心后取上清，-80℃保存?zhèn)溆谩o(wú)菌條件下獲取正常妊娠6～8周絨毛組織，經(jīng)胰蛋白酶/DNA酶I聯(lián)

2、合消化后，Percoll密度梯度離心法行純化培養(yǎng)，將最終獲得的滋養(yǎng)層細(xì)胞應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法對(duì)其進(jìn)行純度鑒定，并同時(shí)傳代培養(yǎng)。將傳1-2代的滋養(yǎng)層細(xì)胞隨機(jī)分為4組：A1組（研究1組）：加入EmAb(+)血清不加LMWH，A2組（研究2組）：加入EmAb(+)血清及LMWH，B1組（對(duì)照1組）：加入EmAb(-)血清不加LMWH，B2組（對(duì)照2組）：加入EmAb(-)血清及LMWH。按上述分組培養(yǎng)24小時(shí)后，采用MTT法檢測(cè)490nmOD值

3、；細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果：
　　 1．MTT法檢測(cè)490nmOD值。
　　 A1組OD值為0.1007±0.0125，B1組為0.2117±0.0106，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；A2組為0.1982±0.0135，與A1組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);B2組為0.2211±0.0080，與B1組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.0

4、5)。
　　 2．細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)PCNA平均熒光灰度值(％)A1組、B1組平均熒光灰度值分別為(9.77±0.61)％和(21.40±1.93)％，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；A2組為(20.96±1.31)％，與A1組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);B2組為(22.42±1.70)％，與B1組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率(％)A1組、B1組細(xì)胞凋亡率

5、分別為(2.64±0.10)％和(0.79±0.03)％，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);A2組為(0.82±0.02)％，與A1組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);B2組為(0.76±0.03)％，與B1組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 本實(shí)驗(yàn)證明，EmAb可通過抑制絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖、促進(jìn)細(xì)胞的凋亡，影響此細(xì)胞的發(fā)育能力，進(jìn)而對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生影響，而LMWH能調(diào)