蝦青素在香煙煙霧提取物誘導(dǎo)氣道上皮MUC5AC高分泌中的作用.pdf

1、背景:氣道黏液高分泌是慢性氣道疾病的重要病理特征。黏蛋白是維持氣道黏液黏彈性的主要成分，MUC5AC是病理狀態(tài)下氣道主要的分泌蛋白。吸煙是慢性氣道疾病主要危險(xiǎn)因素。香煙中活性氧激活EGFR，順次激活下游信號(hào)通路，誘導(dǎo)黏蛋白MUC5AC高表達(dá)。蝦青素是類胡蘿卜素的一種，具有極強(qiáng)的抗氧化活性，可以清除氧自由基，抑制ROS的產(chǎn)生?；赗OS在氣道黏蛋白MUC5AC高分泌中的作用及蝦青素的抗氧化活性，我們探討蝦青素對(duì)香煙煙霧提取物誘導(dǎo)氣道黏蛋白

2、MUC5AC的作用。
　　目的:探討蝦青素對(duì)香煙煙霧提取物誘導(dǎo)氣道黏蛋白MUC5AC高分泌的作用及相關(guān)機(jī)制。
　　方法:(1)體外培養(yǎng)A549細(xì)胞，利用香煙煙霧提取物構(gòu)建氣道黏蛋白MUC5AC高分泌模型。MTT法檢測(cè)蝦青素對(duì)于細(xì)胞增殖的影響，確定蝦青素的濃度。給予不同濃度的香煙煙霧提取物(2.5％、5％、10％)刺激A549細(xì)胞24小時(shí)，采用RT-PCR檢測(cè)MUC5ACmRNA變化，ELISA檢測(cè)MUC5AC蛋白變化。確定構(gòu)

3、建模型成功后，將細(xì)胞分為5組:陰性對(duì)照組、模型組、模型+8uM ATX組、模型+16uM ATX組、模型+32uM ATX組;分別采用RT-PCR法及ELISA法檢測(cè)MUC5AC基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)情況。
　　(2)將細(xì)胞分為5組:陰性對(duì)照組、模型組、模型+ATX(32uM)組、模型+DMTU(20uM)組、模型+ATX+DMTU組。多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS變化、RT-PCR檢測(cè)MUCSAC基因轉(zhuǎn)錄變化，ELISA法檢測(cè)MUC5

4、AC蛋白表達(dá)變化，Western blot法檢測(cè)EGFR、p-EGFR變化。
　　結(jié)果:(1)成功構(gòu)建香煙煙霧提取物誘導(dǎo)氣道黏蛋白MUC5AC高分泌模型;不同濃度香煙煙霧提取物刺激A549細(xì)胞24小時(shí)后，MUC5ACmRNA及蛋白表達(dá)增加，且呈濃度依賴性。MTT結(jié)果顯示，蝦青素濃度低于32uM寸對(duì)于細(xì)胞增殖作用較弱，當(dāng)蝦青素濃度達(dá)到64uM時(shí)，細(xì)胞增殖抑制率超過(guò)50％，所以選擇8uM、16uM、32uM三個(gè)濃度為實(shí)驗(yàn)濃度。不同濃度

5、蝦青素干預(yù)后可以明顯降低香煙煙霧提取物誘導(dǎo)的MUC5AC mRNA及蛋白表達(dá)。
　　(2)與模型組相比，蝦青素(32uM)干預(yù)組可以明顯降低細(xì)胞內(nèi)ROS含量，Western blot結(jié)果顯示EGFR、p-EGFR含量也明顯降低。
　　結(jié)論:(1)香煙煙霧提取物可以刺激氣道上皮細(xì)胞MUC5AC基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，而蝦青素可以降低香煙煙霧誘導(dǎo)的MUC5AC基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)。
　　(2)蝦青素降低香煙煙霧提取物誘導(dǎo)的MCU