蝦青素在香煙煙霧提取物誘導氣道上皮MUC5AC高分泌中的作用.pdf

1、背景:氣道黏液高分泌是慢性氣道疾病的重要病理特征。黏蛋白是維持氣道黏液黏彈性的主要成分，MUC5AC是病理狀態(tài)下氣道主要的分泌蛋白。吸煙是慢性氣道疾病主要危險因素。香煙中活性氧激活EGFR，順次激活下游信號通路，誘導黏蛋白MUC5AC高表達。蝦青素是類胡蘿卜素的一種，具有極強的抗氧化活性，可以清除氧自由基，抑制ROS的產(chǎn)生?；赗OS在氣道黏蛋白MUC5AC高分泌中的作用及蝦青素的抗氧化活性，我們探討蝦青素對香煙煙霧提取物誘導氣道黏蛋白

2、MUC5AC的作用。
　　目的:探討蝦青素對香煙煙霧提取物誘導氣道黏蛋白MUC5AC高分泌的作用及相關機制。
　　方法:(1)體外培養(yǎng)A549細胞，利用香煙煙霧提取物構(gòu)建氣道黏蛋白MUC5AC高分泌模型。MTT法檢測蝦青素對于細胞增殖的影響，確定蝦青素的濃度。給予不同濃度的香煙煙霧提取物(2.5％、5％、10％)刺激A549細胞24小時，采用RT-PCR檢測MUC5ACmRNA變化，ELISA檢測MUC5AC蛋白變化。確定構(gòu)

3、建模型成功后，將細胞分為5組:陰性對照組、模型組、模型+8uM ATX組、模型+16uM ATX組、模型+32uM ATX組;分別采用RT-PCR法及ELISA法檢測MUC5AC基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達情況。
　　(2)將細胞分為5組:陰性對照組、模型組、模型+ATX(32uM)組、模型+DMTU(20uM)組、模型+ATX+DMTU組。多功能酶標儀檢測細胞內(nèi)ROS變化、RT-PCR檢測MUCSAC基因轉(zhuǎn)錄變化，ELISA法檢測MUC5

4、AC蛋白表達變化，Western blot法檢測EGFR、p-EGFR變化。
　　結(jié)果:(1)成功構(gòu)建香煙煙霧提取物誘導氣道黏蛋白MUC5AC高分泌模型;不同濃度香煙煙霧提取物刺激A549細胞24小時后，MUC5ACmRNA及蛋白表達增加，且呈濃度依賴性。MTT結(jié)果顯示，蝦青素濃度低于32uM寸對于細胞增殖作用較弱，當蝦青素濃度達到64uM時，細胞增殖抑制率超過50％，所以選擇8uM、16uM、32uM三個濃度為實驗濃度。不同濃度

5、蝦青素干預后可以明顯降低香煙煙霧提取物誘導的MUC5AC mRNA及蛋白表達。
　　(2)與模型組相比，蝦青素(32uM)干預組可以明顯降低細胞內(nèi)ROS含量，Western blot結(jié)果顯示EGFR、p-EGFR含量也明顯降低。
　　結(jié)論:(1)香煙煙霧提取物可以刺激氣道上皮細胞MUC5AC基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達，而蝦青素可以降低香煙煙霧誘導的MUC5AC基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達。
　　(2)蝦青素降低香煙煙霧提取物誘導的MCU