AMPK在香煙煙霧提取物誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞凋亡中的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是導(dǎo)致慢性阻塞性肺疾病病程中細(xì)胞凋亡的重要機(jī)制之一，該研究探討AMPK在香煙煙霧提取物(CSE)通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞(NHBE)凋亡中的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:實驗分四組:空白對照組、AMPK特異性抑制劑(CompoundC)組、CSE組、CSE+ Compound C組，體外培育人支氣管上皮細(xì)胞(NHBE)并分別給予相應(yīng)濃度CSE及Compound C處理。采用Western blot法檢測CHOP

2、、Caspase4、p-AMPK及AMPK蛋白表達(dá)水平，Hoechst33342染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變及流式細(xì)胞學(xué)檢測細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果:細(xì)胞生存率與CSE干預(yù)濃度和時間呈負(fù)相關(guān)，CSE最佳干預(yù)濃度為2％，最佳干預(yù)時間為24h。與正常對照組相比，CSE干預(yù)組中蛋白p-AMPK/AMPK表達(dá)下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，而CHOP、Caspase4蛋白表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05);Compound C

3、+CSE組與正常對照組、CSE組比較，p-AMPK/AMPK表達(dá)明顯降低，而Caspase4、CHOP表達(dá)顯著增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05); Hoechst33342染色細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯示:與正常對照組比，CSE組、Compound C+CSE組細(xì)胞均出現(xiàn)典型的凋亡特征，細(xì)胞核呈現(xiàn)濃染、顆粒塊狀熒光及明顯的形態(tài)裂化，其中Compound C+CSE組凋亡特征較CSE組更加明顯;流式細(xì)胞學(xué)檢測顯示:各實驗組均出現(xiàn)不同程度比率凋

4、亡細(xì)胞，以早期凋亡為主。無論早期凋亡率還是總凋亡率，CSE組VS.正常對照組、Compound C+CS VS.CSE組細(xì)胞凋亡比率均明顯增加增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)?？瞻讓φ战M、CSE組、Compound C+CSE組流式細(xì)胞學(xué)檢測的早期凋亡率依次為(1.480±0.217)％、(26.860±2.946)％、(43.620±2.536)％，且CHOP的表達(dá)與其具有一致性，而Compound C組無論細(xì)胞形態(tài)及早期凋亡率