我國(guó)部分地區(qū)成人面部皮膚老化相關(guān)因素及香煙煙霧提取物與尼古丁致皮膚老化作用和機(jī)制的研究.pdf

1、本課題研究目的： 1、研究中國(guó)人面部皮膚衰老過(guò)程中皺紋和色素變化的特點(diǎn)，調(diào)查光暴露時(shí)間、吸煙和性別等因素與中國(guó)人面部皮膚衰老的關(guān)系。 2、探討香煙煙霧提取物(CSE)和尼古丁對(duì)原代培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和本研究受2007年中華醫(yī)學(xué)會(huì)一歐萊雅中國(guó)人健康皮膚研究項(xiàng)目資助(2007040809)3、觀察CSE對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞膠原合成的影響；明確CSE致皮膚成纖維細(xì)胞的氧化損傷機(jī)制。 研究方法： 1、采用面對(duì)面

2、的現(xiàn)場(chǎng)問(wèn)卷調(diào)查方式進(jìn)行隨機(jī)的調(diào)查，對(duì)被調(diào)查者的年齡、性別、吸煙和光暴露時(shí)間等信息進(jìn)行采集。被調(diào)查者需進(jìn)行面部拍照，采集圖像。按照J(rèn)in Hochung的東亞人面部圖像冊(cè)對(duì)每個(gè)調(diào)查者的面部圖像進(jìn)。行比對(duì)分級(jí)。然后采用按照?qǐng)D像比對(duì)的方法對(duì)每個(gè)調(diào)查者的面部圖像的皺紋和色素變化情況進(jìn)行評(píng)分和分級(jí)。然后在SPSS 11.5軟件包下對(duì)各影響因素進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2、采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)CSE和尼古丁對(duì)體外皮膚成纖維細(xì)胞存活

3、力的影響，并在光鏡下和透射電鏡下觀察CSE作尉后的細(xì)胞形態(tài)和顯微結(jié)構(gòu)變化；繪制不同濃度的CSE和尼古丁作用于成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)：β一半乳糖苷酶染色方法檢測(cè)CSE連續(xù)作用5代后成纖維細(xì)胞β-半乳糖苷酶的變化情況，并繪制正常培養(yǎng)5代和CSE連續(xù)作用5代后細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的CSE作用于成纖維細(xì)胞后細(xì)胞周期的變化情況。 3、用分光光度檢測(cè)法及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR>法澍定CSE對(duì)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基中分泌的

4、膠原含量和Ⅰ型前膠原表達(dá)的影響；用分光光度法檢測(cè)胞漿內(nèi)活性氧(ROS)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 1、色素斑和脂溢性角化的數(shù)目隨著年齡的增長(zhǎng)而增多；在50歲年齡段以上女性人群中色素斑的數(shù)目要比男性多，而在_60歲以上男性人群申脂溢性角化的數(shù)目要比女性更為普遍；年齡與皺紋改變、色素變化成正相關(guān)。在控制了年齡和性別之后，皺紋與色素改變存在著正相關(guān)。除年齡外，吸煙、光暴露時(shí)間和女性性別均是發(fā)生嚴(yán)重皺紋

5、的危險(xiǎn)因素。 2、CSE作用細(xì)胞后成纖維細(xì)胞呈典型的損傷形態(tài)；隨著CSE濃度的增大和作用時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞存活力明顯下降，高濃度的尼古丁可以使成纖維細(xì)胞的存活力下降，而低濃度的尼古丁則促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖能力；細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)示CSE各染毒組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度較對(duì)照組明顯減慢，而低濃度的尼古丁作用的各組細(xì)胞生長(zhǎng)速度較對(duì)照組明顯增快；CSE染毒作用五代后的細(xì)胞經(jīng)β-半乳糖苷酶呈顯著陽(yáng)性；CSE長(zhǎng)期連續(xù)作用后的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)示細(xì)胞的生長(zhǎng)速度明顯減

6、慢，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期消失；細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)顯示隨著CSE作用濃度的加大和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，G<,1>期、G<,2>期細(xì)胞數(shù)增加，S期細(xì)胞數(shù)減少。 3、CSE能夠顯著降低成纖維細(xì)胞分泌的可溶性膠原含量，上述抑制作用隨著藥物濃度的增高而增強(qiáng)；采用RT-PCR法對(duì)成纖維細(xì)胞Ⅰ型前膠原的著藥物深度的增高增強(qiáng)；采用RT-PCR法對(duì)成纖維細(xì)Ⅰ型前膠原的mRNA進(jìn)行檢測(cè)，顯示隨著CSE濃度的增高其表達(dá)量降低：CSE作用于細(xì)胞后，細(xì)胞胞漿內(nèi)ROS含量升高

7、，SOD活性降低。 結(jié)論： 1、皺紋變化同色素改變一樣是中國(guó)人皮膚老化的主要特征。吸煙，光暴露和女性性別是皺紋發(fā)生的危險(xiǎn)因素。 2、CSE對(duì)體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞具有損傷作用，對(duì)細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)有一定的抑制作用；高濃度的尼古丁對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞具有損傷作用，低濃度尼古丁對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用；CSE引起細(xì)胞DNA復(fù)制和有絲分裂障礙，對(duì)細(xì)胞的G<,1>期、G<,2>期有不同程度的阻滯。低濃度CSE長(zhǎng)期的作