血管擴(kuò)張刺激磷蛋白磷酸化在失血性休克大鼠腸屏障功能障礙中的作用.pdf

1、嚴(yán)重創(chuàng)傷或失血性休克(hemorrhagic shock，HS)后常出現(xiàn)腸屏障功能障礙，表現(xiàn)為腸上皮通透性出現(xiàn)增高，引起腸道細(xì)菌移位(bacterial translocation，BT)和腸源性膿毒血癥，甚至導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory respone syndrome，SIRS)和多器官功能障礙綜合征(multiple organ disfunction syndrome，MODS)，危及患者生

2、命。基礎(chǔ)研究表明，腸上皮細(xì)胞間的緊密連接，選擇性的調(diào)節(jié)分子和離子從細(xì)胞間通過腸上皮，在腸上皮通透性和腸屏障功能的調(diào)節(jié)中有重要作用，緊密連接功能主要取決于由一系列結(jié)構(gòu)蛋白。在失血性休克后，腸屏障功能障礙與緊密連接的重要結(jié)構(gòu)蛋白閉鎖連接蛋白-1(zonula occludens-1，ZO-1)表達(dá)降低和從緊密連接蛋白復(fù)合體解離有關(guān)；高脂腸內(nèi)營養(yǎng)可防治失血性休克后的ZO-1蛋白丟失，保護(hù)腸屏障功能。在人微血管內(nèi)皮細(xì)胞，免疫沉淀發(fā)現(xiàn)，ZO-1可

3、結(jié)合一種作為屏障功能重要調(diào)節(jié)靶點(diǎn)的磷酸化蛋白，這種磷酸化蛋白就是血管擴(kuò)張刺激磷蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein，VASP)，VASP最早發(fā)現(xiàn)于血小板，是一種黏著斑的結(jié)合和調(diào)節(jié)蛋白。在內(nèi)皮細(xì)胞中，VASP可受PKA磷酸化Ser-157位點(diǎn)后，改變與ZO-1的結(jié)合，從而調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的屏障功能。由于腸上皮細(xì)胞(intestinal epithelial cell，IEC)也表達(dá)VASP蛋白，VA

4、SP磷酸化在失血性休克后的腸屏障功能障礙中有何作用，機(jī)制如何，是否與ZO-1有關(guān)？ 方法：本實(shí)驗(yàn)采用失血性休克大鼠模型，以血清二胺氧化酶(diamineoxidase，DAO)活性、血漿D-乳酸含量以及腸粘膜上皮組織形態(tài)反映腸粘膜屏障功能，研究VASP磷酸化在失血性休克后腸屏障功能障礙中的作用和調(diào)節(jié)機(jī)制： 1.VASP磷酸化在失血性休克后腸屏障功能障礙中的作用 (1)觀察失血性休克后大鼠腸屏障功能的變化，腸粘膜組

5、織VASP、磷酸化VASP(Ser-157)蛋白表達(dá)的變化，分析休克后VASP及磷酸化VASP蛋白表達(dá)變化與腸屏障功能變化的關(guān)系。 (2)觀察PKA激動(dòng)劑cAMP(可磷酸化VASP的Ser-157位點(diǎn))對失血性休克后大鼠腸屏障功能的影響，闡明VASP磷酸化在失血性休克后腸屏障功能障礙中的作用。 2.VASP磷酸化調(diào)節(jié)失血性休克后腸屏障功能障礙與ZO-1的關(guān)系 (1)觀察失血性休克后大鼠腸粘膜組織ZO-1蛋白表達(dá)的

6、變化，分析休克后ZO-1蛋白表達(dá)變化與腸屏障功能變化的關(guān)系。 (2)觀察cAMP對失血性休克大鼠腸粘膜組織ZO-1蛋白表達(dá)的影響，分析VASP磷酸化調(diào)節(jié)失血性休克后腸屏障功能的可能機(jī)制。 結(jié)果： 1.與正常對照相比，失血性休克后大鼠血清DAO活性、血漿D-乳酸含量增高，休克1h增高幅度較小，休克2h和4h增高幅度較大(P<0.01)，腸粘膜上皮組織形態(tài)顯示明顯的損傷改變；失血性休克后腸粘膜組織的VASP蛋白表達(dá)逐

7、漸降低(P<0.01)，磷酸化VASP(Ser-157)表達(dá)增高(P<0.01)，但增高幅度從休克2h開始降低。cAMP可增高休克2h腸粘膜組織的磷酸化VASP(Ser-157)表達(dá)(P<0.01)，同時(shí)降低休克2h大鼠血清DAO活性、血漿D-乳酸含量，減輕腸粘膜上皮組織形態(tài)的損傷改變。 2.與正常對照相比，失血性休克后腸粘膜組織的ZO-1蛋白表達(dá)逐漸降低(P<0.01)，與休克2h組相比，cAMP可增高休克2h的腸粘膜組織ZO