人卵巢癌耐藥細胞株的放化療交叉耐受性實驗研究.pdf

1、卵巢癌是嚴重威脅婦女生命和健康的常見惡性腫瘤，其發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中排第3位，死亡率位居首位。卵巢癌細胞對放、化療不敏感或在治療過程中產(chǎn)生耐藥性或抗性是造成腫瘤復發(fā)、轉移及死亡率居高不下的重要原因。因此研究卵巢癌放療及化療敏感性的相關機制,對提高療效克服放射耐受、化療耐藥、延長患者生存期具有重要的理論及現(xiàn)實意義。
　　目前國內(nèi)外主要集中于射線照射對腫瘤細胞化療耐藥的影響與化療耐藥對腫瘤放射敏感性的影響的研究，而關于腫瘤放化療交叉

2、耐受性的實驗研究甚少。探討有關卵巢癌細胞的放化療交叉耐受性機理，尚未見文獻報道。本研究以人卵巢癌細胞株A2780及其紫杉醇耐藥株A2780/Taxol為研究對象，一方面比較分析人卵巢癌細胞株A2780及其紫杉醇耐藥株A2780/Taxol的放射敏感性，觀察腫瘤化療耐藥對卵巢癌細胞放射敏感性的影響；另一方面比較分析照射前后A2780/Taxol細胞和其親代A2780細胞中耐藥相關蛋白表達水平的改變，研究放療對化療耐藥的影響。初步探討人卵巢

3、癌細胞株的放化療交叉耐受性機理，從而為臨床腫瘤對放化療交叉耐受的逆轉提供實驗依據(jù)。
　　目的：
　　1.研究耐藥A2780/Taxol細胞和其親代A2780細胞對60Coγ射線的放射敏感性，觀察紫杉醇耐藥A2780/Taxol細胞是否具有對60Coγ射線的輻射耐受性，分析化療耐藥對放射敏感性的影響。
　　2.研究照射前后A2780/Taxol細胞和其親代A2780細胞中耐藥相關蛋白P-gp、MRP1、P53、PKC-α

4、的表達水平改變，分析放射對化療耐藥性的影響。
　　3.初步探討人卵巢癌細胞株的放化療交叉耐受性機理。
　　方法
　　1MTT法檢測細胞的藥物敏感性，繪制細胞生長曲線，計算細胞倍增時間，并分析細胞放射敏感性。
　　2克隆形成實驗分析細胞放射抗拒性。
　　3流式細胞術檢測照射前后細胞凋亡率及細胞周期變化。
　　4Westernblot法檢測照射前后P-gp、MRP1、P53、PKC-α蛋白的表達情況。

5、r>　　結果：
　　1.A2780/Taxol細胞的耐藥指數(shù)為43.96(P<0.01)。
　　2.不同照射劑量處理后，耐藥的A2780/Taxol細胞凋亡率均低于其親本細胞A2780(P<0.05)；4Gy60Coγ射線照射后24～72hA2780細胞呈現(xiàn)G1期細胞阻滯和S期細胞比例下降,耐藥的A2780/Taxol細胞則呈G1期細胞比例減少和S期細胞比例增加。
　　3.WesternBlot法檢測照射前后P-gp、

6、MRP1、P53、PKC-α蛋白的表達情況：
　　（1）A2780細胞：2Gy、4Gy、8Gy照射作用后,A2780細胞中P-gp蛋白、MRP1蛋白、PKC-α蛋白、P53蛋白的表達水平，均高于對照(0Gy)（P<0.05）。
　?。?）A2780/Taxol細胞：2Gy照射作用后，A2780/Taxol細胞中P-gp蛋白、PKC-α蛋白的表達水平高于對照(0Gy),（P<0.05）；2Gy、8Gy照射作用后，A2780/T

7、axol細胞中P53蛋白的表達水平，均高于對照(0Gy)（P<0.05）。
　?。?）比較A2780細胞和A2780/Taxol細胞中P-gp、MRP1、P53、PKC-α蛋白表達水平：在照射前及2Gy、4Gy、8Gy照射作用后，A2780/Taxol細胞中P-gp蛋白表達水平，均高于A2780細胞（P<0.01）；在照射前及8Gy照射作用后，A2780/Taxol細胞中MRP1蛋白表達水平，均高于A2780細胞（P<0.01）；

8、在照射前及2Gy照射作用后，A2780/Taxol細胞中PKC-α蛋白表達水平，均高于A2780細胞（P<0.05）；照射前，A2780/Taxol細胞中P53蛋白表達水平高于A2780細胞（P<0.05）。
　　結論：
　　1.卵巢癌耐藥細胞株A2780/Taxol表現(xiàn)出一定程度的輻射抗性，具有放化療交叉耐受性。
　　2.放射線照射可以改變?nèi)寺殉舶┘毎闍2780以及其耐藥細胞株A2780/Taxol中耐藥相關蛋白的