MOC-31及HBME-1在肺癌患者胸水中的診斷研究.pdf

1、目的： 肺癌是我國高發(fā)腫瘤，且絕大多數(shù)肺癌可引起惡性胸水，目前臨床上常用的胸腔積液查瘤細胞的方法敏感性甚低，文獻報道為58％［1，2］，部分胸腔內(nèi)已有明顯腫瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的患者，胸腔積液中脫落瘤細胞檢查仍可為陰性。 常規(guī)的細胞學(xué)檢查主要是依靠癌細胞的形態(tài)特點進行診斷。由于癌細胞在積液中無組織及器官構(gòu)架的束縛而自由漂浮和增生甚至經(jīng)幾代繁殖，失去了原來在組織中的形態(tài)特征，故單純依靠形態(tài)學(xué)進行診斷敏感性較低，尤其是較早期異型性不

2、太明顯的癌細胞與反應(yīng)性間皮細胞幾乎無法區(qū)別，以至造成診斷結(jié)果中存在著相當數(shù)量的假陰性。建立一組科學(xué)、有效的診斷方法是提高肺癌診斷陽性率的有效途徑，也是提高肺癌患者生存率與治愈率的關(guān)鍵。 本課題以目前國內(nèi)外死亡率較高的肺癌為主攻對象，以肺癌患者的胸水為檢測基礎(chǔ)，采用RT-PCR方法測定癌細胞中MOC-31轉(zhuǎn)錄水平；采用免疫細胞化學(xué)［2］測定癌蛋白在癌細胞中的定位表達，采用間皮細胞標志物HBME-1與MOC-31聯(lián)合應(yīng)用構(gòu)成一組正反

3、互補單克隆抗體組，從正反兩個方面篩查肺癌患者胸水中的癌細胞，探討診斷肺癌性胸水的新途徑，評價這三種檢測指標單一和聯(lián)合應(yīng)用對惡性胸水的臨床應(yīng)用價值。 方法： 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2006年4月至2006年11月門診及住院患者100例，其中：原發(fā)性肺癌56例，肺良性疾病患者44例。 1、免疫細胞化學(xué)染色(1)收集胸水中細胞沉渣制作石蠟包埋塊。 (2)切片，應(yīng)用免疫細胞化學(xué)方法(streptavidin

4、-peroxidase，S-P)染色。檢測MOC-31的表達情況。 2、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(yīng)(Reverese transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)擴增及擴增產(chǎn)物的分析(1)收集胸水中細胞沉渣提取總RNA。 (2)總RNA的反轉(zhuǎn)錄及MOC-31基因片段的擴增。 (3)利用凝膠分析儀觀察并分析結(jié)果。 結(jié)果： 1、免疫細胞化學(xué)檢測MOC-31在肺癌患者

5、胸水中的陽性率71.4％(40/56)而在44例良性胸水中無陽性表達0％(0/44)。 2、HBME-1在良性胸水中的陽性率93.2％(41/44)明顯高于在肺癌患者胸水中的陽性率19.6％(11/56)，兩組間HBME-1陽性表達率有顯著性差異(χ2=53.4 P<0.01)。 2、RT-PCR檢測肺癌組胸水中MOC-31mRNA陽性表達率為91.1％(51/56)，肺良疾病組胸水中MOC-31mRNA陽性表達率為9.

6、1％(4/44)。兩組間MOC-31mRNA陽性表達率有顯著性差異(χ2=66.9,P<0.01)；肺癌組胸水中M0c-31mRNA陽性表達率與病理分型無關(guān)（給χ2=1.66，P>0.05)。 3、兩種檢測方法單一及聯(lián)合應(yīng)用對肺癌性胸水診斷效能的比較，其中免疫細胞化學(xué)檢測HBME-1與MOC-31mRNA聯(lián)合應(yīng)用有著最好的敏感度和準確度，分別為96.4％(54/56)，93.0％(93/100)。 討論： MOC

7、-31又稱做人類全癌上皮相關(guān)糖蛋白-2(human pancarcinoma-associated epithelial glycoprotein-2，EGP-2)［3］，是上皮分化的可靠標記物。理論上講，只有上皮來源的細胞才能表達MOC-31，非上皮來源的細胞不表達，因此檢測MOC-31表達與否有助于確定胸腔積液內(nèi)細胞的來源。良性胸水內(nèi)只存在炎癥細胞和間皮細胞，沒有上皮來源細胞，如果出現(xiàn)MOC-31表達陽性的細胞多意味著上皮性腫瘤細胞

8、轉(zhuǎn)移所致。 近年來免疫細胞化學(xué)逐漸成為胸腔積液診斷及鑒別診斷的主要方法，它能輔助肺癌患者胸腔積液的細胞學(xué)診斷。MOC-31是上皮細胞的分子標記，HBME-1是間皮細胞的分子標記，本研究中兩者聯(lián)合應(yīng)用構(gòu)成一組正反互補單克隆抗體組，從正反兩個方面篩查肺癌患者胸腔積液中的癌細胞。結(jié)果顯示，平行實驗分析MOC-31和HBME-1的檢測結(jié)果，確實能進一步提高診斷的效率，其敏感度和準確度可分別達82.1％(46/56)、86.0％(86/1

9、00)。 采用RT-PCR技術(shù)檢測胸水內(nèi)的微轉(zhuǎn)移癌細胞，以達到早期診斷目的。該方法具有較高的敏感性，可在106～107個細胞中檢測到1個目標細胞[4]。此外，RNA在細胞外環(huán)境中非常不穩(wěn)定，如在胸水內(nèi)檢測出MOC-31mRNA，則從理論上可以認為胸水中有癌細胞的存在。目前有關(guān)MOC-31mRNA在肺癌診斷中表達情況的研究未見報道。本研究結(jié)果提示用MOC-31mRNA檢測肺癌患者胸水中癌細胞既可作為重要的診斷指標，又可作為檢測肺癌

10、胸膜轉(zhuǎn)移的參考指標。 本研究中，應(yīng)用免疫細胞化學(xué)檢測MOC-31及HBME-1，RT-PCR方法檢測MOC-31可有效的提高肺癌胸水診斷的敏感度，單獨應(yīng)用敏感度最高的為MOC-31mRNA達91.1％，三種檢測指標兩兩聯(lián)合應(yīng)用時，免疫細胞化學(xué)檢測HBME-1與MOC-31mRNA聯(lián)合應(yīng)用可獲得最佳敏感度和準確度分別為96.4％(54/56)、93.0％(93/100)，對診斷癌性胸水有重要的臨床價值，可作為研究早期癌細胞播散的一