hK7增加DU145體外侵襲力并改變其細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài).pdf

1、背景：本課題組在前期一個(gè)國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目的研究中發(fā)現(xiàn)：KLK7在有或無(wú)間質(zhì)共培養(yǎng)的良性前列腺增生上皮細(xì)胞中差異表達(dá)KLK7編碼的蛋白為hK7。hK7與PSA都是分泌性、具有糜蛋白酶樣活性的絲氨酸蛋白酶，兩者的編碼基因都屬于kallikrein基因家族，hK7最早被報(bào)道在皮膚角質(zhì)層中表達(dá)，可促進(jìn)皮膚脫屑過(guò)程。其主要機(jī)制是hK7通過(guò)降解細(xì)胞間的連接結(jié)構(gòu)，降低細(xì)胞附著力，從而使表皮細(xì)胞脫落。腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的起點(diǎn)或者說(shuō)重要環(huán)節(jié)之一就是

2、首先癌細(xì)胞從原發(fā)部位脫落。hK7對(duì)前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移等惡性表型是否有影響，目前尚未見(jiàn)有報(bào)道。目的：研究hK7對(duì)前列腺癌細(xì)胞惡性表型的影響，探索hK7的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法： 1．首先利用基因克隆等分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建hK7的重組表達(dá)載體pcDNA3.1-KLK7： 2．然后重組載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞系22RV1及DUl45，在前列腺癌細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)hK7蛋白，獲得的研究對(duì)象用于表型測(cè)定和觀察； 3．最后

3、，測(cè)定并觀察hK7對(duì)前列腺癌細(xì)胞系生長(zhǎng)、侵襲、克隆形成能力和細(xì)胞形態(tài)等腫瘤相關(guān)表型的影響。 結(jié)果： 1．成功構(gòu)建hK7的重組表達(dá)載體； 2．在前列腺癌細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)hK7； 3．表達(dá)hK7對(duì)前列腺癌細(xì)胞系生長(zhǎng)增殖無(wú)顯著影響； 4．表達(dá)hK7對(duì)DU145體外形成克隆的個(gè)數(shù)無(wú)明顯影響； 5．hK7顯著增強(qiáng)DU145體外侵襲基質(zhì)膠的能力； 6．初步結(jié)果表明，hK7促使DU145發(fā)生類(lèi)上