減體肝移植后受體來源骨髓干細(xì)胞跨分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:肝組織再生是肝臟對損傷修復(fù)反應(yīng)的基本特征，為肝臟對損傷或?qū)δ苷{(diào)節(jié)的精細(xì)協(xié)調(diào)性增生反應(yīng)。由于肝臟強(qiáng)大的再生能力，小體積減體肝移植才得以成功開展以彌補(bǔ)移植領(lǐng)域供體器官來源的不足。在肝臟組織缺損后，除成熟肝細(xì)胞能大量增生以外，已經(jīng)證明某些前體細(xì)胞或干細(xì)胞能衍化成肝細(xì)胞，這些細(xì)胞主要來自肝內(nèi)卵圓細(xì)胞和來自肝外的骨髓造血干細(xì)胞。已有一些動物實(shí)驗(yàn)研究闡述了造血干細(xì)胞在機(jī)體非造血組織損傷修復(fù)細(xì)胞分化中的作用，但關(guān)于減體肝移植后造血干細(xì)胞在肝組

2、織中的分化，目前還未闡明。本實(shí)驗(yàn)旨在研究大鼠減體肝移植后受體來源的造血干細(xì)胞在肝組織中跨分化的可能性以及部分相關(guān)影響因素，為促進(jìn)減體肝移植后肝細(xì)胞再生提供新的思路應(yīng)用前景。 方法: 1.首先采用LEwIs大鼠同基因原位肝移植模型觀察30％部分肝移植后肝臟增生的動態(tài)過程，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)對肝臟細(xì)胞增生的時相性進(jìn)行觀察。采用性別交叉雌性到雄性大鼠肝移植模型進(jìn)行30％，60％及100％不同大小移植物同基因原位肝移植。應(yīng)用N

3、ASDCL特殊染色檢測肝臟中前體細(xì)胞的數(shù)量，觀察受體來源骨髓干細(xì)胞在肝臟中的募集，同時利用免疫熒光原位雜交技術(shù)檢查移植肝臟中受體來源Y-染色體陽性的肝細(xì)胞數(shù)量，觀察不同大小移植物、缺血損傷及G-CSF對部分肝移植后受體來源骨髓干細(xì)胞在肝臟中跨分化的影響。 2．部分肝移植后造血干細(xì)胞在肝臟內(nèi)跨分化 用雌性到雄性性別交叉肝臟原位移植大鼠模型研究造血干細(xì)胞(HSOs)在減體移植肝中的跨分化，用免疫熒光定位顯示受體來源ttSCs在肝臟

4、跨分化成肝細(xì)胞的比率。前一實(shí)驗(yàn)顯示肝細(xì)胞增生主要過程持續(xù)一周左右，因此我們選擇移植手術(shù)后的7天作為實(shí)驗(yàn)觀察終點(diǎn)，全肝移植Y一染色體陽性肝細(xì)胞率為0.66％，為低頻率增生，而60％和30％減體肝移植Y一染色體陽性肝細(xì)胞率增加到1.89％和3.78％(各組間比較，p

5、87組比較。 3．粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)對受體來源跨分化為肝細(xì)胞的影響用NASDCL染色顯示肝臟內(nèi)前體細(xì)胞，觀察G-CSF對HSCs肝內(nèi)募集的影響，當(dāng)G-CSF應(yīng)用于全肝移植時，與非治療組(7.8±1.9／10LPF)相比，G-CSF能使移植肝內(nèi)前體細(xì)胞數(shù)增加到59.5±13.3％／10LPF。將G-cSF運(yùn)用于30％減體肝移植時，與非治療組(21.O±5.1／10LPF)比較，G-CSF能使移植肝內(nèi)前體細(xì)胞明顯增加到

6、99.2±7.2／10L,PF(p<0.01)。而且，將部分肝移植與全肝移植比較，無論是否運(yùn)用G-CSF，30％減體肝移植均能在一定程度上增加HSCs在肝內(nèi)的募集。說明GcSF和部分肝移植對HsCs在肝內(nèi)的募集可能存在協(xié)同作用。另外，G-CSF能明顯提高30％減體肝移植肝臟內(nèi)Y-染色體陽性肝細(xì)胞率。然而，全肝移植組，G-CSF對受體來源HSCs在肝臟內(nèi)跨分化的Y-染色體陽性肝細(xì)胞率卻沒有影響。 結(jié)論: 1．在大鼠全肝移植