自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植于脊髓損傷處的存活及分化.pdf

1、目的:觀察自體移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在脊髓半橫斷損傷處的存活及分化情況。
　　 方法:36只雄性SD大鼠被隨機分為BMSCs自體移植組(即實驗組)和PBS對照組,每組18只。BMSCs自體移植組的大鼠均截取左側(cè)脛腓骨進(jìn)行骨髓的采集,聯(lián)合采用密度梯度離心與貼壁篩選法純化培養(yǎng)BMSCs至第4代并對其表型進(jìn)行鑒定,建立脊髓半橫斷損傷模型后立即在脊髓半橫斷損傷處及其上下3mm范圍內(nèi)各選取1個注射點,每個注射點注射經(jīng)Hoec

2、hst33342標(biāo)記的單細(xì)胞懸液3ul(細(xì)胞密度為5×103個/ul);PBS對照組亦在上述位置各注射3ulPBS液。于移植后2周、3周及5周行損傷部位脊髓冰凍切片觀察細(xì)胞局部存活情況,同時行免疫熒光組織化學(xué)染色檢測自體移植的BMSCs是否表達(dá)微管相關(guān)蛋白-2(MAP-2)及膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)。
　　 結(jié)果:1.流式鑒定第4代BMSCs,其CD29及CD90的表達(dá)率分別為97.17％、99.49％,基本上不表達(dá)造血干細(xì)

3、胞的表面標(biāo)志CD45。2.BMSCs移植后的2周、3周及5周,注射點周圍均可見經(jīng)Hoechst33342標(biāo)記的細(xì)胞存活,其中2周時細(xì)胞存活較多,5周時細(xì)胞存活較少。3.BMSCs移植后的2周及3周未檢測到存活細(xì)胞表達(dá)MAP-2及GFAP,而5周時檢測到部分存活細(xì)胞表達(dá)MAP-2及GFAP。
　　 結(jié)論:1.采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離培養(yǎng)BMSCs,其第4代細(xì)胞純度高,可用于后續(xù)細(xì)胞移植實驗。2.脊髓損傷后立即進(jìn)行自體移