人肝癌細(xì)胞系HCC-9903的建立及肝癌X染色體畸變和TK、CD雙自殺基因治療的研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文人肝癌細(xì)胞系HCC9903的建立及肝癌X染色體畸變和TK、CD雙自殺基因治療的研究姓名：劉軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：普通外科指導(dǎo)教師：王占民2001.5.15山東太掌醫(yī)掌院詞士掌位論文因此我們以該細(xì)胞系為模型，應(yīng)用近年迅速發(fā)展起來的熒光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)技術(shù)，選擇x染色體對肝癌的染色體畸變進(jìn)行探討。在國際上第一次以FISH技術(shù)發(fā)現(xiàn)肝癌中X染色體拷貝數(shù)明

2、顯增多。自殺基因?qū)δ[瘤的殺傷作用已得到公認(rèn)，但此研究基本上局限在單一自殺基因，其殺傷力較小、耐藥性及毒副作用較大等缺陷有待克服。因此，聯(lián)合基因治療開始出現(xiàn)。我們又以HCC一9903細(xì)胞系為模型，應(yīng)用目前先進(jìn)的TK與CD雙自殺基因，開展了對肝癌基因治療的初步探討。礦7目的應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)方法，進(jìn)一步探討肝癌發(fā)生、發(fā)展的規(guī)律及基因治療的有效性，降低其毒副作用，為肝癌研究提供新的實驗?zāi)Ｐ汀?方法以外科手術(shù)切除肝癌腫瘤標(biāo)本作原代培養(yǎng)，

3、建立細(xì)胞系，通過光鏡、電鏡、倍增時間、生長曲線、雙層軟瓊脂培養(yǎng)、流式細(xì)胞儀、染色體核型分析、AFP、HBV測定、刀豆球蛋白凝集試驗、裸鼠接種及端粒酶檢測，對其生物學(xué)特性作以研究。用x染色體著絲粒特異DNA探針對肝癌細(xì)胞系HCC9903進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)，探討肝癌x染色體拷貝數(shù)變異。以脂質(zhì)體介導(dǎo)法，將雙自殺基因TK與CD轉(zhuǎn)移入PA317包裝細(xì)胞，獲穩(wěn)定的產(chǎn)病毒株后，以滴度最高的PA317病毒上清液感染肝癌細(xì)胞HCC一9903，遺