血管基膜衍生多功能肽治療腫瘤主要藥效學(xué)及信號蛋白磷酸化比較研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文血管基膜衍生多功能肽治療腫瘤主要藥效學(xué)及信號蛋白磷酸化比較研究姓名：曹建國申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：鄧漢武20060501中南大學(xué)博t學(xué)位論文中文摘要第一部分重組血管基膜衍生多功能肽抗血管新生活性及信號蛋白磷酸化比較研究方法體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮(HUVEC121細胞，采用MTr法檢測rVBMDMP對刪、，EC一12細胞增殖活性的影響；臺盼藍染色細胞計數(shù)法測定其對HUVEC12細胞生長的影響；內(nèi)皮管結(jié)構(gòu)形

2、成實驗觀測其對內(nèi)皮細胞管結(jié)構(gòu)形成能力的影響；PI染色流式細胞術(shù)分析其對mⅣEc—12細胞凋亡率的影響；吖啶橙染色熒光顯微鏡觀察rVBMDMP作用后內(nèi)皮細胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；劃痕法測定其對HUVEC12細胞遷移能力的影響；制備全細胞抽提液，采用信號傳導(dǎo)抗體芯片TMHypromatrix檢測rVBMDMP處理前后HUVEC12細胞信號蛋白的酪氨酸(絲氨酸及蘇氨酸1磷酸化水平變化。結(jié)果MTT法、臺盼藍染色細胞計數(shù)法結(jié)果顯示：rVBMDMP能顯

3、著抑制HuvEc—12細胞增殖和生長，其作用呈濃度和時間依賴性。rvBMDMP(10uM)作用96h時，HuVEC—12細胞的活細胞數(shù)僅為溶酶對照組的50％。內(nèi)皮管結(jié)構(gòu)形成實驗結(jié)果表明，rVBMDMP能顯著降低內(nèi)皮細胞管結(jié)構(gòu)數(shù)目(176743055vs5033430551。流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，rVBMDMP處理后內(nèi)皮細胞凋亡率呈濃度依賴性增加，其中rVBMDMP(1O洲)組凋亡率高達144l％。吖啶橙染色熒光顯微鏡觀察，rVBMDMP作

4、用后的內(nèi)皮細胞呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)學(xué)改變。劃痕法結(jié)果表明，rVBMDMP對HUVEC12細胞遷移能力無明顯影響?？贵w芯片檢測結(jié)果顯示，與10％小牛血清刺激增殖的HUVEC12細胞相比較，rVBMDMP(10曲I)處理30分鐘后，HUVEC—12細胞磷酸化水平升高的蛋白包括：整合蛋白Qv、pl和B3亞單位，生長因子結(jié)合蛋白(Grb21，細胞『日J粘附分子(PECAM1、ICAM1)，細胞凋亡執(zhí)行分子Caspase3，細胞支架和緊密連接蛋白(C

5、onnexin43、Ezrin、Paxillin、ZO—l、PAR一3)，非受體酪氨酸激酶Axl、Csk和轉(zhuǎn)錄因子ATF一3、p—ArF一3、Ets—l／2，死亡受體包括DR3、DR4、DR5、受體相互作用蛋白(RIP)，干擾素相關(guān)因子(IRFl、IRF2)；磷酸化水平降低的蛋白包括：周期調(diào)控蛋白(CyclinA、CyclinB、CyclinE、CDK2)，上皮生長因子受體(EGFR、pEGFR)，血管內(nèi)皮生長因子受體VEGFRI，生存