胞嘧啶脫氨酶基因真核表達載體的構建及轉染人骨髓間充質干細胞的研究.pdf

1、目的:(1)克隆酵母菌胞嘧啶脫氨酶(yeast cytosinedeaminase，YCD)基因FCY1片段，構建pcDNA3.1-FCY1真核表達載體。(2)檢測其在人骨髓間充質干細胞(Human Bone marrow-derivedmesenchymal stem cells，BMSCs)的表達。
　　方法:(1)從釀酒酵母菌基因組DNA中克隆FCY1基因CDS區(qū)全序列，構建真核表達載體pcDNA3.1/myc-His A+

2、-FCY1。(2)通過用PCR擴增、酶切電泳分析及DNA測序的方法對重組DNA進行鑒定。(3) Percoll密度梯度離心法從人骨髓中分離BMSCs，貼壁培養(yǎng)，從形態(tài)學特征、流式分析細胞免疫表型、特異性基因表達對BMSCs進行鑒定。(4)脂質體介導轉染BMSCs并通過RT-PCR檢測其在BMSCs中的表達。
　　結果:(1)經(jīng)PCR擴增、酶切電泳分析和DNA測序證實，本實驗構建的重組質粒目的基因片段為YCD基因FCY1-cDNA。