SOX9基因真核表達載體轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)間充質(zhì)干細胞分化為類髓核細胞的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討重組質(zhì)粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag體外轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)兔間充質(zhì)干細胞向椎間盤細胞分化的影響。
　　方法：構(gòu)建真核表達載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。取一月齡新西蘭大白兔骨髓分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞，體外誘導(dǎo)間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化并鑒定；流式細胞儀檢測細胞表面標(biāo)志物；將第3代MSCs隨機分為轉(zhuǎn)染組和對照組，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞，經(jīng)G418篩選2w后，采用RT-PCR檢測SOX9和Ⅱ型膠原的mRNA的表

2、達，Western-blot檢測SOX9蛋白的表達，免疫組化染色觀察Ⅱ型膠原的表達。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了SOX9基因的真核表達載體。間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)7d后堿性磷酸酶染色可見細胞呈陽性；CD44表達陽性，CD45和CD34表達陰性。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔間充質(zhì)干細胞，72h后觀察到轉(zhuǎn)染效率為34.32％±1.75％；轉(zhuǎn)染2周后的間充質(zhì)干細胞形態(tài)改變，呈多角形或橢圓形，細胞體積增大，增殖速度減緩，與椎間盤髓核細胞特性類似。RT-PCR

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