SOX9基因真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞分化為類髓核細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：探討重組質(zhì)粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag體外轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)兔間充質(zhì)干細(xì)胞向椎間盤細(xì)胞分化的影響。
　　方法：構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。取一月齡新西蘭大白兔骨髓分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞，體外誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化并鑒定；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物；將第3代MSCs隨機(jī)分為轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)G418篩選2w后，采用RT-PCR檢測(cè)SOX9和Ⅱ型膠原的mRNA的表

2、達(dá)，Western-blot檢測(cè)SOX9蛋白的表達(dá)，免疫組化染色觀察Ⅱ型膠原的表達(dá)。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了SOX9基因的真核表達(dá)載體。間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)7d后堿性磷酸酶染色可見細(xì)胞呈陽(yáng)性；CD44表達(dá)陽(yáng)性，CD45和CD34表達(dá)陰性。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔間充質(zhì)干細(xì)胞，72h后觀察到轉(zhuǎn)染效率為34.32％±1.75％；轉(zhuǎn)染2周后的間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)改變，呈多角形或橢圓形，細(xì)胞體積增大，增殖速度減緩，與椎間盤髓核細(xì)胞特性類似。RT-PCR