不同濃度的胎牛血清對骨髓間充質干細胞純度及周期的影響.pdf

1、目的:比較含有體積分數為0.10,0.15,0.20的胎牛血清(fetal bovine serum FBS)的完全培養(yǎng)基對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)純度及細胞周期的影響,尋求適宜干細胞培養(yǎng)的FBS濃度。
　　方法:用頸椎脫臼法處死SD大鼠,采用全骨髓貼壁分離培養(yǎng)大鼠BMSCs。實驗分為A、B、C三組,FBS體積分數分別是0.10、0.15、0

2、.20的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的BMSCs,比較這三組細胞在第2、3、4、5代的CD45、CD29、CD90、CD44的表達情況;收集A組P3細胞,加成骨誘導液,用茜素紅檢測鈣結節(jié)的形成結果;消化 A組P3細胞,用3種不同濃度的完全培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)4 d,用流式細胞儀測其在培養(yǎng)后的24、48、72、96 h的細胞周期;收集P3 BMSCs制備細胞懸液接種到6塊96孔板,每塊板接種的BMSCs分別用FBS體積分數是0.10、0.15、0.20的完全

3、培養(yǎng)基進行培養(yǎng),每天取1塊板用CCK-8檢測其吸光度(OD)。
　　結果:CD45分子陰性,CD29、CD90、CD44分子陽性,3種完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的BMSCs的表面標志物在前2代時差別較大,但在P3、P4時差別已較少,P4時,均可以獲得較純的BMSCs;A組 P3細胞經過成骨誘導后發(fā)現有鈣結節(jié)的產生;細胞周期結果顯示,在同一時間點,G0/G1期:A、B、C三組隨著胎牛濃度的增加,G0/G1期降低且無差異;G2/M期:在培養(yǎng)后的2

4、4 h,A、B、C三組有差異(P<0.05,F=12.412),但隨著時間的延長,差異消失;S期,三組均無差別;S+G2/M期隨胎牛濃度的增加而增高。細胞活力結果顯示,在24 h時A、B、C三組的OD值依次增大,有差異統(tǒng)計學意義(P<0.05,F=5.002),隨時間的延長三組之間差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論:這3種培養(yǎng)基在第4代均能獲得較純的BMSCs;細胞周期及活力結果顯示,3種完全培養(yǎng)基均能促進 BMSCs的增長,三組之間差