IP-10基因治療聯(lián)合吉西他濱抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、趨化因子(chemokine)是一類小分子物質(zhì)，有誘導(dǎo)體內(nèi)白細(xì)胞運(yùn)輸?shù)墓δ堋P-10(Interferon-γ-inducibleprotein10)是α趨化因子家族成員，具有抗血管作用，表現(xiàn)為抑制新生血管的形成。許多文獻(xiàn)報(bào)道IP-10具有抑制腫瘤血管的作用，而且還有研究表明，化療與抗腫瘤血管治療結(jié)合具有協(xié)同作用。但I(xiàn)P-10基因治療聯(lián)合化療藥物吉西他濱治療腫瘤尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬用IP-10基因與化療藥物吉西他濱聯(lián)合，觀察抗小鼠腫瘤

2、作用并初步探討其作用機(jī)理。 首先將pBLASTIP-10質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌E.coliJM109中，挑取單菌落經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)增后，制備并純化質(zhì)粒。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將IP-10質(zhì)粒DNA導(dǎo)入COS細(xì)胞，免疫印跡法(Westernblot)及ELISA方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染上清中IP-10的表達(dá)，觀察表達(dá)IP-10蛋白的上清聯(lián)合吉西他濱對(duì)體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC，SVEC)的增殖抑制情況。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染IP-10基因的COS細(xì)胞能表達(dá)具有生物學(xué)

3、活性的IP-10蛋白，IP-10聯(lián)合吉西他濱能增強(qiáng)抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。 研究IP-10基因在小鼠體內(nèi)的表達(dá)，分別以不同劑量的IP-10質(zhì)粒DNA肌肉注射，ELISA方法檢測(cè)不同的時(shí)間點(diǎn)小鼠血清中IP-10蛋白表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IP-10在小鼠體內(nèi)可以持續(xù)表達(dá)，以每次100μg質(zhì)粒DNA注射時(shí)表達(dá)濃度最高，200μg質(zhì)粒注射未產(chǎn)生明顯增高的蛋白表達(dá)。以不同劑量IP-10質(zhì)粒DNA肌肉注射荷瘤小鼠，結(jié)果顯示IP-10基因的體內(nèi)抗腫瘤作用

4、存在劑量依賴性。采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法研究IP-10基因治療聯(lián)合化療藥物吉西他濱的抗腫瘤效果。建立BALB/c小鼠肝癌(H22)和C57BL/6小鼠Lewis肺癌(LL/2)兩種動(dòng)物腫瘤模型，分別隨機(jī)分為IP-10基因聯(lián)合吉西他濱組，吉西他濱組，IPP-10基因組及生理鹽水組。探討IP-10基因治療聯(lián)合化療藥物吉西他濱的抗腫瘤效果及作用機(jī)制。觀察小鼠生存情況，記錄生存率及腫瘤體積變化。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：聯(lián)合治療組小鼠腫瘤的生長(zhǎng)明顯減慢，荷瘤小鼠生存期

5、延長(zhǎng)，部分小鼠腫瘤甚至完全消退。腫瘤組織微血管免疫組化染色，計(jì)數(shù)每高倍視野微血管數(shù)，發(fā)現(xiàn)兩種荷瘤小鼠聯(lián)合治療組及IP-10基因組微血管密度明顯低于吉西他濱組和生理鹽水組；TUNEL法檢測(cè)腫瘤組織中細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示聯(lián)合治療組腫瘤組織中細(xì)胞凋亡明顯增多。藻酸鹽包裹實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：IP-10基因治療聯(lián)合吉西他濱組血管生成明顯減少，與其它各組比較FITC攝取率明顯降低。本研究還觀察了IP-10基因治療聯(lián)合吉西他濱抗腫瘤治療的毒副作用，結(jié)果顯示在