SM22α在血管緊張素-II誘導的血管平滑肌細胞收縮中的作用及機制.pdf

1、目的：血管緊張素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)是一種血管平滑肌細胞(VSMC)收縮興奮劑。SM22α是一種actin結(jié)合蛋白，僅表達于收縮型的VSMCs中。SM22α是否參與Ang-Ⅱ誘導的VSMC收縮，尚不清楚。體外培養(yǎng)的VSMCs已發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，由收縮型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣尚?，失去收縮能力。本研究用全反式維甲酸(ATRA)誘導培養(yǎng)的VSMCs再分化，采用RNA干擾技術(shù)，敲低內(nèi)源性SM22α表達，觀察SM22α在Ang-Ⅱ誘導的VSMC收縮中的作用，并探討

2、其作用機制。
　　 方法與結(jié)果：
　　 1、ATRA誘導體外培養(yǎng)的VSMCs再分化SM22α和SM-α-actin的表達是分化型VSMCs的重要分子標志。ATRA誘導40h后，與正常培養(yǎng)(10％FBS)的VSMCs相比，SM-α-actin和SM22α的表達明顯上調(diào)，說明ATRA可誘導VSMCs再分化。
　　 2、再分化的VSMCs對Ang-Ⅱ刺激產(chǎn)生收縮應(yīng)答用Ang-Ⅱ（0.1μM）刺激常規(guī)培養(yǎng)和ATRA處理4

3、0h的VSMCs，細胞的收縮能力明顯不同。再分化的VSMCs的收縮指數(shù)(0.28±0.019)顯著高于對照組(0.06±0.01)。
　　 3、SM22α參與Ang-Ⅱ誘導的VSMC收縮使用RNA干擾技術(shù)敲低內(nèi)源性SM22α的表達后，觀察對AngⅡ誘導的VSMC收縮的影響。結(jié)果顯示，敲低組的細胞收縮指數(shù)(0.11±0.015)低于對照組(0.29±0.021)，兩組之間有顯著差異。提示Ang-Ⅱ誘導的VSMC收縮依賴于SM22α

4、。
　　 4、Ang-Ⅱ誘導的VSMC收縮依賴于ERK通路的活化Ang-Ⅱ刺激導致ERK的磷酸化活化。用PD98059（10μM）(ERK上游激酶MEK抑制劑)抑制ERK的激活，Ang-Ⅱ誘導的細胞收縮減弱，收縮指數(shù)(0.13±0.012)顯著低于對照組(0.26±0.023)。上述結(jié)果提示，ERK信號通路介導Ang-Ⅱ誘導的VSMC收縮。
　　 5、SM22α參與Ang-Ⅱ誘導的ERK活化用siRNA敲低內(nèi)源性SM22

5、α表達，觀察對Ang-Ⅱ誘導的ERK活化的影響。Westernblot分析表明，Ang-Ⅱ刺激后，對照組及SM22α敲低組的ERK磷酸化水平均有升高，但SM22α敲低組的上升幅度顯著低于對照組。
　　 6、SM22α參與actin應(yīng)力纖維的形成細胞免疫熒光染色結(jié)果顯示，ATRA處理的細胞，其SM22α表達量豐富，應(yīng)力纖維呈束狀，排列規(guī)則，SM22α與應(yīng)力纖維共定位。而SM22α敲低組的應(yīng)力纖維稀疏，在胞漿散在分布。以上結(jié)果說明，