免疫抑制劑對(duì)腎毒血清性腎炎大鼠腎組織中TNF-α與NF-κB表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討免疫抑制劑麥考酚酸嗎乙酯、來氟米特和他克莫司對(duì)大鼠腎毒血清性腎炎的干預(yù)治療作用；探討腎毒血清性腎炎大鼠腎組織中TNF-α、NF-κB表達(dá)的特點(diǎn)及免疫抑制劑麥考酚酸嗎乙酯、來氟米特和他克莫司對(duì)其表達(dá)的影響。 方法：本試驗(yàn)主要分三個(gè)階段：第一階段，制備腎毒性血清。體重180～200g的雄性SD大鼠，處死后摘取腎臟，經(jīng)腎動(dòng)脈灌注無菌冰生理鹽水充分沖洗，分離腎皮質(zhì)制備腎皮質(zhì)組織勻漿，與等量完全弗氏佐劑充分混合后給予4只新西蘭白

2、兔皮下多部位多次注射，誘導(dǎo)兔生成大鼠腎毒血清；第二階段探索誘導(dǎo)大鼠腎毒血清性腎炎的腎毒血清最適用量；第三階段觀察免疫抑制劑麥考酚酸嗎乙酯、來氟米特和他克莫司對(duì)大鼠腎毒血清性腎炎干預(yù)治療作用及對(duì)其腎組織中TNF-α與NF-κB表達(dá)的影響，SD大鼠50只，隨機(jī)抽取10只為正常對(duì)照組，其余40只全部給予兔IgG皮下注射進(jìn)行預(yù)免疫，5天后其余40只采用靜脈注射兔抗鼠腎小球基底膜(GBM)抗血清(NTS)制備腎毒血清性腎炎大鼠模型，并隨機(jī)分為病理

3、對(duì)照組、麥考酚酸嗎乙酯干預(yù)組、來氟米特干預(yù)組和他克莫司干預(yù)組，每組各10只，正常對(duì)照組同時(shí)給予生理鹽水。造模同時(shí)各治療組均給予相應(yīng)藥物灌胃給藥每天一次，2周后觀察血清總蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平并處死大鼠，留取腎組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)分析，并應(yīng)用免疫組織化學(xué)觀察腎組織中TNF-α與NF-κB的表達(dá)。 結(jié)果：(1)間接免疫熒光檢測(cè)結(jié)果示4只新西蘭白兔中有2只產(chǎn)生高滴度兔(1∶128～1∶25

4、6)抗大鼠腎小球基底膜抗體；(2)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果提示給予大鼠4ml/kg腎毒血清可誘導(dǎo)大鼠形成具有相應(yīng)臨床表現(xiàn)和腎臟病理改變的經(jīng)典腎毒血清性腎炎動(dòng)物模型；(3)各組較病理對(duì)照組細(xì)胞數(shù)及新月體百分比減少(P<0.01)，各治療組較正常對(duì)照組細(xì)胞數(shù)增多(P<0.01)，正常對(duì)照組無新月體形成，來氟米特治療組較他克莫司治療組細(xì)胞數(shù)及新月體百分比減少(P<0.05)，且較麥考酚酸嗎乙酯治療組減少更明顯(P<0.01)，他克莫司治療組較麥考酚酸嗎乙酯

5、治療組新月體百分比減少(P<0.05)；(4)TNF-α腎小球的表達(dá)中，各組均較病理對(duì)照組降低(P<0.01)；各治療組均較正常對(duì)照組升高(P<0.01)；各治療組間比較，來氟米特治療組較其余兩組降低(P<0.01)，他克莫司治療組雖較麥考酚酸嗎乙酯治療組降低，但差別無顯著性；腎小管的表達(dá)中，各組均較病理對(duì)照組降低(P<0.01)，各治療組間比較，來氟米特治療組雖較其它兩組降低，但差別無顯著性，各治療組均較正常對(duì)照組升高(P<0.01)

6、；(5)NF-κB在病理對(duì)照組腎小球和腎小管中的表達(dá)均較正常對(duì)照組增高(P<0.01)，與病理對(duì)照組比較，麥考酚酸嗎乙酯、來氟米特和他克莫司治療后可使其表達(dá)減少(P<0.01)，且來氟米特治療組較其它兩藥組下降明顯(P<0．01)，麥考酚酸嗎乙酯治療組較他克莫司治療組在腎小管中表達(dá)升高(P<0.05)且在腎小球中表達(dá)亦升高(P<0.01)。各治療組與病理對(duì)照組比較Tp、Alb增加(P<0.01)，Scr、BUN降低(P<0.01)。