3日齡新生大鼠慢性腦缺血后腦室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的凋亡、增殖及分化研究.pdf

1、目的：為研究未成熟腦缺血性損傷后腦室下區(qū)細(xì)胞的變化，建立3日齡SD新生大鼠缺血性腦損傷模型；觀察3日齡SD大鼠慢性缺血性腦損傷后腦室下區(qū)細(xì)胞的凋亡變化，了解未成熟腦缺血性損傷后腦進(jìn)一步損傷的發(fā)病機(jī)理，為干預(yù)治療提供時(shí)間窗；觀察3日齡SD大鼠慢性缺血性腦損傷后腦室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的變化，為誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞參與腦損傷后神經(jīng)自身修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和時(shí)間窗；觀察3日齡SD大鼠慢性缺血性腦損傷后腦部各結(jié)構(gòu)內(nèi)新生神經(jīng)細(xì)胞的變化，為進(jìn)一步研究新生

2、細(xì)胞產(chǎn)生機(jī)制及新生細(xì)胞的功能提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：3日齡SD新生大鼠隨機(jī)分為兩組：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈，造成未成熟腦慢性腦缺血；對(duì)照組雙側(cè)頸總動(dòng)脈不結(jié)扎。眥染色后顯微鏡下測(cè)量側(cè)腦室面積、側(cè)腦室上方胼胝體厚度，Luxol快藍(lán)(Luxolfastblue)染色，了解腦損傷后紋狀體髓鞘數(shù)量的變化；采用TUNEL法結(jié)合HE染色顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，分別了解腦缺血后腦室下區(qū)背側(cè)、前端細(xì)胞凋亡變化；采用BrdU標(biāo)記，免疫熒

3、光染色的方法，了解腦損傷后不同時(shí)期，腦室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的變化；采用BrdU標(biāo)記，免疫熒光染色的方法，了解未成熟腦損傷后腦部各結(jié)構(gòu)內(nèi)新生神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞)的變化。 結(jié)果：①形態(tài)變化：3同齡sD新生大鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎后l周開始，胼胝體漸變薄，腦室漸擴(kuò)大，髓鞘形成明顯減少。②凋亡細(xì)胞數(shù)變化：腦室下區(qū)背側(cè)、前段在缺血后48h、72h和1周凋亡細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組增多(P<0．01)，于72h時(shí)間點(diǎn)兩組差異最為顯

4、著(背側(cè)：實(shí)驗(yàn)組87．0±¨．5，對(duì)照組60．9±7．1；前端(冠狀位)：實(shí)驗(yàn)組86．1±5．5，對(duì)照組56．4±5．6；前端(矢狀位)：實(shí)驗(yàn)組69．1±3．5，對(duì)照組44．0±2．3，p值皆O．05)，神經(jīng)干細(xì)胞未見凋亡。③增殖細(xì)胞數(shù)變化：腦室下區(qū)背側(cè)、前段BrdU+細(xì)胞分別計(jì)數(shù)，在腦缺血后4—7天細(xì)胞增殖達(dá)高峰，SVZdl在術(shù)后4天、SVZa在術(shù)后7天時(shí)間點(diǎn)兩組差異最為顯著(SVZd

5、l實(shí)驗(yàn)組253．1±49．3，對(duì)照組133．5±17．7；SVZa：實(shí)驗(yàn)組233．0±¨．6，對(duì)照組¨0．4±48．4，p值皆<0．01)，在損傷10天后增殖細(xì)胞開始減少，但仍較對(duì)照組為高，增殖細(xì)胞大多為神經(jīng)干細(xì)胞。④SVZ細(xì)胞的分化及分布變化：在損傷后35天，與對(duì)照組相比新生神經(jīng)元在嗅球、皮質(zhì)、紋狀體分布增多，以嗅球?yàn)樽疃?嗅球：98．0±16．3vs52．5±3．7，P值<0．01)；與對(duì)照組相比新生少突膠質(zhì)細(xì)胞在胼胝體、嗅球、紋狀

6、體分布增多，在胼胝體分布最多(56．0±7．2vs17．0±6．4，P值<0．01)；與對(duì)照組相比新生星形膠質(zhì)細(xì)胞在胼胝體、紋狀體、嗅球分布增多(胼胝體：26．9±5．4vs15．5±3．9，紋狀體：32．5±6．2vs18．8±6．2，嗅球：42．5±9．1vs19．0±5．1，P值<0．01)。 結(jié)論：3日齡SD大鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎腦缺血模型可作為未成熟腦損傷研究的模型選擇；未成熟腦慢性缺血后，腦室下區(qū)細(xì)胞對(duì)缺氧缺血敏感、易發(fā)

7、生凋亡，可能為早產(chǎn)兒腦白質(zhì)進(jìn)一步損傷的機(jī)制之一，提示缺血后48—72小時(shí)可能為防治腦室下區(qū)細(xì)胞損傷的時(shí)間窗；慢性腦缺血后，腦室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖增加，提示在缺血后4-7天可能為誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干／祖細(xì)胞參與腦損傷修復(fù)的最佳時(shí)間點(diǎn)；未成熟腦慢性腦缺血后，在嗅球、胼胝體、紋狀體、皮質(zhì)皆有不同的新生神經(jīng)細(xì)胞，提示未成熟腦在缺血腦損傷后，SVZ不但神經(jīng)干細(xì)胞增殖增加，而且新生的神經(jīng)干細(xì)胞具有遷移、分化的功能，表明未成熟腦損傷后SVZ有修復(fù)腦損傷的