大腸癌細(xì)胞TLR4-MyD88表達(dá)及臨床預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、 背景與目的：在世界范圍內(nèi),大腸癌( colorectal cancer,CRC) 在惡性腫瘤中排第三位,在癌癥引起死亡病例中排第五位,每年有 100多萬的大腸癌新發(fā)病例。目前在中國內(nèi)地,大腸癌發(fā)病率正以4.71%逐年遞增,遠(yuǎn)超2%的國際水平。因為但其發(fā)病機制尚目前尚未完全闡明而造成診斷和治療上的困難是其發(fā)病率、死亡率居高不下的重要原因之一。Toll-樣受體(TLRs)是天然免疫相關(guān)性抗原識別受體,表達(dá)于免疫細(xì)胞表面,在抵制入侵的病原

2、體的免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵作用。到目前為止至少有11個Toll樣受體已經(jīng)被證實存在于哺乳動物中,分別命名為TLR1-11,并參與免疫和非免疫細(xì)胞識別的病原體相關(guān)的分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMP),如脂多糖(lipopolysaccharides,LPS),雙鏈 RNA 病毒,和未甲基化CpG島。Toll樣受體傳遞信號是通過四個適配器的蛋白質(zhì),即,髓樣分化因子88(MyD88),

3、MyD88相似適配器,Toll/IL1R域的接頭分子誘導(dǎo)干擾素-?,TRIF相關(guān)的接頭分子。刺激TLRS導(dǎo)致核因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB)的活化和有絲分裂原活化蛋白激酶,這是必不可少的 TLR 激活的經(jīng)典成果：宿主先天免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。 Toll 樣受體介導(dǎo)的先天免疫或獲得性免疫可作為一種有效的免疫佐劑,可以使用在腫瘤免疫治療或腫瘤聯(lián)合治療中。然而,近年來大量的國內(nèi)外研究證據(jù)表明,功能性TLRs在

4、很多腫瘤中表達(dá)。諸多國內(nèi)外學(xué)者對大腸癌的發(fā)病機制進(jìn)行了深入的研究,同時發(fā)現(xiàn) Toll樣受體(Toll-like receptor,TLRs)在結(jié)直腸癌細(xì)胞及組織中均也有表達(dá),大量國內(nèi)外的研究也認(rèn)為Toll樣受體對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著重要影響,特別是與炎癥相關(guān)的腫瘤,如肝癌、結(jié)腸癌、胃癌和宮頸癌等。在天然免疫系統(tǒng)中,TLRs 是其重要組成部分,而且隨著諸多國內(nèi)外學(xué)者對腫瘤發(fā)病機制的相關(guān)研究,并證實了 Toll 樣受體 4 (Toll-li

5、ke receptor-4,TLR4)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在體外和體內(nèi)均有致癌效應(yīng)。髓樣分化因子 88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)是TLRs 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要的銜接蛋白,其相應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑包括MyD88依賴的途徑和非依賴途徑。MyD88之所以能夠作為TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要的下游信號因子,是因為它含有 TIR 結(jié)構(gòu)域。MyD88與致瘤相關(guān)促炎反應(yīng)密切相關(guān)。,在TRLs信號傳導(dǎo)通路中起著

6、關(guān)鍵性的作用。TRLs信號通過MyD88激活核因子-κB(NF-κB)信號通路, 從而激活磷脂酰肌醇 3 激酶/絲蘇氨酸蛋白激酶(phosphatei-dylinositol 3 kinase/serine-threonine kinase,PI3K/Akt) 或者能夠引起多種細(xì)胞因子的釋放,來促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡及免疫逃逸等機制,從而導(dǎo)致大腸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移。為了證明 TLR-4 信號通路在大腸腫瘤形成中的

7、作用,我們本研究通過對大腸癌(CRC)細(xì)胞中通過異常表達(dá)的TLR-4和MyD88的表達(dá)水平的檢測進(jìn)行了研究,了解 TLR-4 信號通路在大腸腫瘤形成中的作用,結(jié)合臨床病理特點和隨訪資料統(tǒng)計分析研究,并對表明其在大腸腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用及與臨床預(yù)后中的均有密切相關(guān)性進(jìn)行了詳盡的分析研究。
材料和方法：
1. 采用免疫組織化學(xué)方法分別檢測Toll樣受體4及髓樣分化因子88在101例大腸癌樣本,10例腺

8、瘤樣本,10例癌旁正常的黏膜組織樣本的 石蠟包埋病理切片中的表達(dá)情況。
2.對大腸癌患者的臨床病理資料進(jìn)行了完整的收集,包括患者的人口統(tǒng)計信息(性別,年齡)和腫瘤特征(解剖部位,組織學(xué)類型,血管侵犯,淋巴管浸潤,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,肝轉(zhuǎn)移,腹膜轉(zhuǎn)移,TNM分期)及生存時間等?；仡櫺苑治隽薚LR-4和MyD88的表達(dá)與大腸癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系,以及TLR-4和MyD88的相關(guān)性。
3. 相關(guān)性用 Pearson 卡方

9、檢驗或者是 Fisher 精確檢驗,運用kaplan-meier進(jìn)行單因素及生存率的分析及計算,運用Log—rank進(jìn)行差異顯著性檢驗,運用COX比例風(fēng)險模型進(jìn)行多因素生存分析。
結(jié)果：
1.TLR-4和MyD88在所有大腸癌組織中均有表達(dá)。
2.與正常黏膜和腺瘤相比,CRC組織顯示有19.8%的TLR4高表達(dá),有22.8%的MyD88高表達(dá)。 TLR4和MyD88的高表達(dá)與肝癌轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P=

10、0.0001,P=0.014)。在單因素分析中,TLR4的高表達(dá)與較短的 DFS(危險比(HR)：2.01；95%可信區(qū)間(95%CI)：1.10-4.27,P=0.018)和OS均有顯著相關(guān)性(危險比(HR)：1.61；95%可信區(qū)間(95%CI)：1.86-5.34,P=0.032)。MyD88的顯著高表達(dá)與較短的DFS和OS(HR：1.91,95%CI：0.98-4.18,P =0.028；HR：1.88,95%CI：1.12-5

11、.67,P=0.019)與是顯著相關(guān)的。TLR4和MyD88聯(lián)合高表達(dá)也與較差的DFS和OS(HR：4.63,95%CI：1.86-11.79,P=0.001 HR：4.44,95%CI：1.64-11.96,P=0.001)有顯著相關(guān)性。多因素分析結(jié)果表明,高表達(dá)TLR4(OS：調(diào)整后的HR：2.23；95%CI：1.18-3.87,P=0.0135)和MyD88(DFS：調(diào)整后的HR：2.1,95%CI：1.01-3.87,P=0.

12、0371；OS：調(diào)整后的HR：4.12, 95%CI：1.71-12.01,P=0.0011)為OS的獨立預(yù)后因素。此外,顯著高表達(dá)的TLR4/MyD88與較短的DFS(調(diào)整后的HR：1.87,95%CI：1.12-3.56,P = 0.0231)和OS(調(diào)整后的HR：6.12,95%CI：2.21-14.14,P=0.0001)也顯著相關(guān)。
結(jié)論：我們的研究結(jié)果表明, TLR4和MyD88的高表達(dá)與肝臟轉(zhuǎn)移有相關(guān)性,并且是