UTRN與肺癌細胞惡性轉(zhuǎn)化關(guān)系的研究.pdf

1、前期的研究工作表明，Utrophin（UTRN）是一個候選的抑癌基因，它在乳腺癌、腎癌、肝癌等多種腫瘤中表達明顯下調(diào)或缺失。為了進一步研究UTRN在肺癌細胞系的表達和定位情況，本研究利用半定量RT-PCR方法檢測了UTRN的表達，結(jié)果表明在15種肺癌細胞系中UTRN呈不同程度的表達下調(diào)，其中4種存在UTRNcDNA7909bp-10277bp處的表達缺失，6種在此區(qū)域表達明顯下降。同時應(yīng)用Westernblotting技術(shù)，對UTRN蛋

2、白進行了定位分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)UTRN在肺癌細胞系A(chǔ)549、AGZY-83a和Anip973的細胞核中存在約130kD的截短蛋白（全長UTRN蛋白約為395kD）。此外，應(yīng)用免疫熒光技術(shù)，與人胚肺細胞MRC-5比較,在肺癌細胞系A(chǔ)549中可見細胞核區(qū)域存在UTRN的表達。綜合分析以上研究結(jié)果，提示UTRN在肺癌細胞中不僅僅是表達缺失或表達降低，還存在著UTRN蛋白的轉(zhuǎn)位和截短。
　　為了進一步明確UTRN基因?qū)毎鲋澈图毎羌艿挠绊?/p>

3、，本實驗以易轉(zhuǎn)化、間變型小鼠成纖維細胞NIH3T3為材料，采用RNAi技術(shù)進行UTRN基因的表達沉默分析。通過繪制細胞增殖曲線和鬼筆環(huán)肽熒光染色方法，發(fā)現(xiàn)UTRN基因表達沉默后，與對照組比較，細胞增殖速度明顯增加；微絲細胞骨架數(shù)量明顯減少、結(jié)構(gòu)紊亂，且細胞表面出現(xiàn)絲足。這些結(jié)果與我們前期以人胚腎HEK293細胞為材料進行的RNA干擾實驗結(jié)果相一致。以上實驗數(shù)據(jù)進一步揭示了UTRN基因作為抑癌基因在細胞內(nèi)行使功能，為深入探討UTRN與腫瘤