Survivin、Bcl-2在兒童骨肉瘤中的表達(dá)與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性及臨床意義.pdf

1、目的：
　　 本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測Survivin、Bcl-2在兒童骨肉瘤組織中的表達(dá)情況,采用DNA末端原位標(biāo)記法(TUNEL法)檢測兒童骨肉瘤組織中的細(xì)胞凋亡,探討上述基因與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性及在兒童骨肉瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及臨床意義。
　　 材料與方法：
　　 本研究標(biāo)本選取1998年1月～2008年3月泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、泰安市婦幼保健院及復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院收治并確診的兒童骨肉瘤病例41例,均經(jīng)石蠟

2、病理確診,將接受規(guī)范治療(包括手術(shù)及術(shù)前術(shù)后的化療)的患兒納入本組研究范圍,共計36例,31例患兒獲術(shù)后門診或電話隨訪,目前能確認(rèn)其生存狀態(tài),5例失訪。失訪患兒在生存分析中以其最后隨訪時間視為死亡日期。其中男17例,女19例；年齡4～12歲,中位數(shù)年齡8.5歲；存活時間6月～113月；發(fā)病部位股骨24例,脛骨7例,肱骨3例,腓骨2例；瘤體最大直徑≤5cm者14例,>5cm者22例:組織病理學(xué)分型:骨母細(xì)胞型13例,軟骨母細(xì)胞型12例,纖

3、維母細(xì)胞型7例,其它4例；腫瘤Enneking分期:Ⅰ A期1例,Ⅰ B期1例,Ⅱ A期9例,Ⅱ B期13例,Ⅲ期12例。其中所有石蠟標(biāo)本采用病理切片號隨機(jī)切片,實(shí)驗后盲法分析。以同期骨軟骨瘤標(biāo)本20例作為對照組。
　　 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法對36例兒童骨肉瘤組織,20例骨軟骨瘤組織中Survivin及Bcl-2的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。探討兒童骨肉瘤中Survivin與Bcl-2表達(dá)的相互關(guān)系,單因素分析其與本組患兒的性別、年齡、原發(fā)

4、腫瘤部位、腫瘤直徑、病理分型、Enneking分期及Survivin與Bcl-2表達(dá)的相關(guān)性。采用DNA末端原位標(biāo)記法(TUNEL法)檢測兒童骨肉瘤及軟骨瘤組織中的細(xì)胞凋亡,計算凋亡指數(shù)(AI)后分析與Survivin及Bcl-2表達(dá)的相關(guān)性,并對其臨床意義進(jìn)行初步探討。
　　 所有資料均用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行處理,具體統(tǒng)計方法包括:卡方檢驗,兩獨(dú)立樣本秩檢驗(Mann-Whitney Test),多獨(dú)立樣本秩檢驗(K

5、ruskal-Wallis Test),Spearman相關(guān)性分析,用Kaplan-Meier法繪制生存曲線,COX模型回歸分析,統(tǒng)計分析檢驗水準(zhǔn)為a=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1.Survivin表達(dá):36例兒童骨肉瘤組織中Survivin表達(dá)陽性率為69.4％(25/36),對照組20例骨軟骨瘤中表達(dá)均為陰性(P<0.01)；Survivin陽性表達(dá)與骨肉瘤的Enneking分期相關(guān),與性別、年齡、腫瘤部位、腫

6、瘤直徑、病理分型無明顯關(guān)系。Enneking分期Ⅰ～Ⅱ與Ⅲ期之間,表達(dá)率差異明顯,EnnekingⅠ～Ⅱ期陽性率為43.4％(10/23),Ⅲ期陽性率為83.3％(10/12),(P(0.05),提示Survivin的陽性表達(dá)與Enneking分期有關(guān)。
　　 2.Bcl-2表達(dá):36例兒童骨肉瘤組織中Bcl-2表達(dá)陽性率為47.2％(17/36),對照組20例骨軟骨瘤組織中未見表達(dá)(P<0.01)；Bcl-2陽性表達(dá)與與性別、

7、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、病理分型無明顯相關(guān),與Enneking外科分期及相關(guān),EnnekingⅠ～Ⅱ期陽性率為30％(6/20),Ⅲ期陽性率為62.5％(10/16),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值<0.05)。說明分期越高,Bcl-2表達(dá)越顯著。
　　 3.Bcl-2的陽性表達(dá)者中Survivin陽性表達(dá)率為88.2％(15/17),陰性表達(dá)者中Bcl-2陽性表達(dá)率為15.7％(3/19),兩者差異統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),等級相

8、關(guān)分析顯示,兒童骨肉瘤組織中Survivin與Bcl-2表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　 4.AI范圍3.6％～16.4％,均值7.3％,經(jīng)檢驗AI在兒童骨肉瘤組性組為(6.66±1.87)％,對照組組為(12.28±3.29)％,兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；說明骨肉瘤中的細(xì)胞凋亡減少。AI在Survivin陽性組為(4.55±0.63)％,陰性組為(6.48±1.47)％,兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)

9、；Survivin的表達(dá)與AI呈負(fù)相關(guān)。AI在Bcl-2陽性組為(4.68±0.57)％和陰性組(6.53±1.65)％兩組間差異有顯著性(P<0.05)。Bcl-2的表達(dá)與AI呈負(fù)相關(guān)。
　　 采用Kaplan-Meier法繪制Survivin及Bcl-2陽性組和陰性組生存曲線,提示Survivin及Bcl-2陽性組生存期顯著低于陰性表達(dá)者。Cox回歸模型進(jìn)行多因素生存分析顯示,骨肉瘤的Enneking分期,Survivin和

10、Bcl一2的表達(dá)水平是兒童骨肉瘤預(yù)后相關(guān)的獨(dú)立的重要因素。
　　 結(jié)論：
　　 1.Survivin在兒童骨肉瘤細(xì)胞中具有較高的表達(dá)率。Survivin在骨肉瘤的表達(dá)與Enneking分期相關(guān),與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、病理分型無明顯相關(guān)。Survivin的陽性表達(dá)縮短骨肉瘤患兒的生存時間。
　　 2.Bcl-2在兒童骨肉瘤中陽性表達(dá)與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、病理分型無明顯相關(guān),與Enneking

11、分期相關(guān)。Survivin表達(dá)與Bcl-2表達(dá)呈正相關(guān)。Bcl-2的陽性表達(dá)縮短骨肉瘤患兒的生存時間。
　　 3.Survivin及Bcl-2的表達(dá)均與AI呈負(fù)相關(guān)。說明Survivin、Bcl-2蛋白可能阻礙了兒童骨肉瘤細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)了腫瘤的分裂增殖。
　　 4.多因素分析顯示,骨肉瘤Enneking外科分期、Survivin及Bcl-2的表達(dá)為骨肉瘤重要的預(yù)后因素。綜合分析以上指標(biāo)對判斷兒童骨肉瘤預(yù)后有重要的參考價