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文檔簡介
1、目的: 觀察實驗性大鼠矽肺形成過程中肺組織FIZZ1蛋白和mRNA表達的動態(tài)變化,F(xiàn)IZZ1與矽肺形成的關系以及沙利度胺對矽肺大鼠肺組織FIZZ1表達的干預作用。
方法: SD大鼠54只,隨機分為3組(對照組、矽肺組和沙利度胺組),每組18只。矽肺組及沙利度胺組均以氣管內注入二氧化硅混懸液(100mg·kg-1)復制實驗性大鼠矽肺模型,對照組用同等方法注入同樣體積的生理鹽水制備對照模型。第二天起沙利度胺組給予沙利度胺(10
2、0 mg·kg-1)飼料喂養(yǎng),其余兩組在相同條件下給予普通飼料喂養(yǎng)。造模后第7、30、60天各組隨機選擇6只大鼠放血處死,取肺組織進行HE 染色、羥脯氨酸含量測定、免疫組織化學染色、實時熒光定量PCR檢測,觀察實驗性大鼠矽肺的發(fā)病過程,肺組織中FIZZl蛋白、mRNA表達水平的動態(tài)變化及其與肺膠原蛋白含量的關系。
結果:
(1)羥脯氨酸測定結果:正常肺組織在第7天、30天、60天各個時間點羥脯氨酸含量無明顯增
3、加;而矽肺組從第7天開始逐步升高,第30天較對照組明顯升高,第60天升高更加顯著;沙利度胺組羥脯氨酸含量變化與矽肺組基本一致,但各個時間點含量均低于矽肺組,高于對照組。
(2)HE染色:對照組未見明顯病變。矽肺組各期均有肺泡炎改變,以第7天最重,可見肺泡間隔水腫,毛細血管增多,肺泡腔內大量炎性細胞滲出;第30天可見肺泡巨噬細胞、淋巴細胞等炎性細胞明顯減少,肺泡間隔內成纖維細胞明顯增多,基質明顯增寬,肺泡結構破壞,可見以Ⅱ期
4、病變?yōu)橹鞯奈Y節(jié);第60天肺泡結構進一步破壞,彌漫性肺間質纖維化,可見孤立或融合的矽結節(jié),以Ⅲ期病變?yōu)橹?。以上結果證實氣管暴露注入二氧化硅混懸液建立大鼠矽肺模型是成功的。沙利度胺組病理變化過程同矽肺組,但第7天炎性細胞滲出明顯減少,第60天大鼠肺組織病變以Ⅱ期矽結節(jié)為主,病變分布范圍亦小于矽肺組。
(3)免疫組化觀察:半定量FIZZ1蛋白結果顯示在正常肺組織中,F(xiàn)IZZ1弱表達于肺泡上皮細胞、細支氣管上皮細胞、巨噬細胞及血
5、管內皮細胞。矽肺組在第7天上述各種細胞陽性著色均較對照組明顯增強,第30天較第7天有所減弱,第60天明顯減弱,但仍強于對照組;沙利度胺組的大鼠肺組織第7天、第30天及第60天細胞陽性著色均較對照組高,但與矽肺組相比,著色減弱,尤以第7天減弱最明顯,但第60天不甚明顯。
(4)熒光實時定量PCR檢測:各組肺組織在各個時段均有FIZZ1 mRNA的表達,但在正常肺組織表達較弱。第7天矽肺組FIZZ1 mRNA顯著增加,第30天
6、時開始減弱,60天時明顯減弱,但仍強于對照組。沙利度胺組在第7天、第30天及第60天FIZZ1 mRNA的表達均較對照組高,但低于矽肺組,尤其是第7天的表達降低最明顯,但第60天不甚明顯,與免疫組化觀察顯示出同樣的變化趨勢。
結論: FIZZl蛋白、mRNA在實驗性大鼠矽肺發(fā)病過程中呈現(xiàn)明顯的動態(tài)變化,矽肺早期尤其是肺泡炎階段FIZZl一過性異常表達旺盛;沙利度胺能在一定程度上降低矽肺大鼠肺組織中膠原蛋白含量和FIZZl的
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