尿酸轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白表達變化與慢性腎臟病患者高尿酸血癥的關(guān)系及其機制研究.pdf

1、許多慢性腎臟病(CKD)患者伴有血尿酸的升高。大量證據(jù)表明高尿酸血癥是心血管和腎臟疾病的獨立危險因素。尿酸主要是通過腎臟排泄的，因此腎臟疾病容易導(dǎo)致尿酸排泄量下降從而發(fā)生高尿酸血癥。尿酸在腎臟的排泄要經(jīng)過濾過、重吸收和分泌三個主要過程：尿酸在腎小球可以自由濾過，然后大部分在腎小管被重吸收，隨后又有部分被重新分泌到腎小管腔，最后只有濾過的10％被排出體外。尿酸在腎小管的重吸收和分泌是由不同的轉(zhuǎn)運蛋白來完成的，其中表達在刷狀緣側(cè)膜的尿酸-有

2、機陰離子交換蛋白(URAT1)負責(zé)尿酸的重吸收，而表達在基底側(cè)膜的有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白1(OAT1)和OAT3負責(zé)尿酸的分泌。因此這三種蛋白的表達變化可能與CKD患者發(fā)生高尿酸血癥關(guān)系密切，但目前尚未見這三種轉(zhuǎn)運蛋白與高尿酸血癥關(guān)系的研究報道。 目的：觀察伴有高尿酸血癥和血尿酸正常的CKD患者腎組織OAT1、OAT3和URAT1表達水平與血尿酸以及尿尿酸水平的關(guān)系，并模仿CKD患者腎臟局部RAAS活化的特點，分別用血管緊張素Ⅱ和醛

3、固酮刺激近段腎小管上皮細胞(HKC)，從細胞水平明確三種蛋白的表達變化導(dǎo)致高尿酸血癥的分子機制。 方法：用基因免疫方法制備小鼠抗人URAT1、OAT1和OAT3多克隆抗體，并對這三種轉(zhuǎn)運蛋白在腎臟的表達進行定位研究；選擇血壓和腎功能均正常的CKD患者40例分為高尿酸血癥組(20例，血尿酸522.22±63.39μmol/L)和正常血尿酸組(20例，血尿酸293.82±65.73μmol/L)，檢測兩組患者24小時尿尿酸水平，免疫

4、組化方法觀察兩組患者OAT1、OAT3和URAT1的表達；分別用血管緊張素Ⅱ和醛固酮刺激培養(yǎng)的人腎小管上皮細胞系(HKC)，Westernblot觀察OAT1、OAT3和URAT1的表達變化，并觀察這種表達變化是否是通過MAPK信號通路的活化來實現(xiàn)的。 結(jié)果：用基因免疫方法成功制備了小鼠抗人URAT1、OAT1和OAT3多克隆抗體，Westernblot結(jié)果顯示小鼠抗人URAT1抗體識別人腎組織58kD的URAT1和64kD糖基

5、化的URAT1，而小鼠抗人OAT1和OAT3抗體也均能識別人腎組織55kD的OAT1和90kD糖基化的OAT1以及57kD的OAT3和92kD糖基化的OAT3；免疫組化結(jié)果顯示URAT1定位在皮質(zhì)近段腎小管上皮細胞刷狀緣，而OAT1和OAT3均表達在基底側(cè)膜；高尿酸血癥組24小時尿尿酸水平明顯低于血尿酸正常組(分別為1.765±0.744mmol/24hours和4.251±2.814mmol/24hours，p＜0.05)；同時高尿酸

6、血癥組腎組織URAT1表達明顯強于正常血尿酸組(p＜0.05)，而OAT1和OAT3的表達兩組間均沒有差別；不同濃度和不同時間的血管緊張素Ⅱ刺激對HKC細胞OAT1、OAT3和URAT1的表達均沒有影響，但醛固酮可以明顯上調(diào)HKC細胞URAT1的表達，同時使ERK1/2MAPK磷酸化活化，ERK通路阻斷劑U0126可以阻斷醛固酮的這些作用，但鹽皮質(zhì)激素受體(MR)阻斷劑螺內(nèi)酯則不能阻斷醛固酮的這些作用。 結(jié)論：我們的研究首次證明