新型肝靶向去甲斑蝥素修飾物納米粒的研制.pdf

1、目的：本課題旨在利用體內(nèi)肝細(xì)胞表面的去唾液酸糖蛋白受體(ASGP-R)能特異性識別藥物分子的半乳糖殘基，將治療原發(fā)性肝癌的去甲斑蝥素(NCTD)進(jìn)行乳糖化修飾得到具有主動肝靶向性的修飾物乳糖化.去甲斑蝥素(Lac-NCTD)，并初步評價了該新化合物的安全性，同時以其為模型藥物制備殼聚糖納米粒(Lac-NCTD-NPs)，并對納米粒的體內(nèi)外抗腫瘤活性進(jìn)行了研究，以期得到一種安全有效的主被動肝靶向相結(jié)合的去甲斑蝥素修飾物納米粒。 方

2、法：(1)利用乙二胺為連接臂合成Lac-NCTD，并測定了藥物的溶解度、油水分配系數(shù)和穩(wěn)定性等基本理化性質(zhì)。(2)通過急性毒性實驗，計算Lac-NCTD腹腔給藥的最大耐受量(MTD)。(3)采用離子誘導(dǎo)法制備Lac-NCTD-NPs，以粒徑分布、包封率、載藥量為綜合指標(biāo)，采用L9(34)正交實驗優(yōu)化制備工藝。(4)采用紅外光譜(FT-IR)、差示掃描量熱法(DSC)、粉末X-ray衍射和透射電鏡等方法和技術(shù)，對Lac-NCTD-NPs的

3、表面特征、外觀形態(tài)進(jìn)行驗證，并以透析袋法考察納米粒膠體的體外釋放特性。(5)通過MTT法考察Lac-NCTD及Lac-NCTD-NPs對腫瘤細(xì)胞株HepG2、SMMC-7721和SGC-7901的細(xì)胞毒作用和半乳糖化小牛血清(Gal-FBS)的競爭性抑制作用。(6)采用HPLC法評價SMMC-7721細(xì)胞對Lac-NCTD的攝取過程。(7)通過建立H22肝癌細(xì)胞小鼠荷瘤模型考察藥物的體內(nèi)抗腫瘤活性。 結(jié)果：(1)Lac-NCTD

4、是一種具有良好水溶性的多羥基化合物，其合成產(chǎn)率為68.35％。(2)急性毒性實驗結(jié)果得出Lac-NCTD單次給藥時MTD>20 g·kg-1，多次給藥時MTD>30 g·kg-1，遠(yuǎn)大于人臨床去甲斑蝥素的擬用量。(3)經(jīng)正交優(yōu)化后，Lac-NCTD-NPs制備工藝條件為：殼聚糖溶液濃度2.0 mg·mL-1、藥物濃度2.0mg·mL-1、殼聚糖和TPP質(zhì)量比3:1，優(yōu)化工藝制備的納米粒的平均粒徑(149.46±1.79)nm，包封率(8

5、0.29±0.56)％，載藥量(9.58±0.09)％。(4)納米粒的FT-IR、DSC、X衍射圖譜中，LCS與TPP的特征吸收峰均消失或轉(zhuǎn)移；透射電鏡(TEM)照片顯示納米粒近似球形、邊緣清晰；納米粒體外釋放符合Higuch方程。(5)體外細(xì)胞毒作用結(jié)果顯示：對HepG2和SMMC-7721，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)48 h時Lac-NCTD-NPs的細(xì)胞毒作用最強(qiáng)，其次是Lac-NCTD，且都能顯著的被Gal-FBS抑制；對SGC-7901，La

6、c-NCTD-NPs和Lac-NCTD的細(xì)胞毒作用并不比NCTD強(qiáng)，且不受Gal-FBS的影響。(6)培養(yǎng)12 h后，SMMC-7721對Lac-NCTD的攝取量為3.89μg·106 cell-1。(7)體內(nèi)抗腫瘤實驗表明Lac-NCTD-NPs能有效地抑制H22腫瘤的生長。 結(jié)論：(1)Lac-NCTD合成簡單，產(chǎn)率高，吸濕性強(qiáng)，保存時需防潮。(2)急性毒性實驗初步證實Lac-NCTD是安全的。(3)該新化合物上大量的-OH

7、能與殼聚糖上正電荷以分子間氫鍵結(jié)合，從而以吸附和包裹的方式形成納米粒以致Lac-NCTD-NPs的包封率明顯地優(yōu)于相同條件下去甲斑蝥素殼聚糖納米粒(NCTD-NPs)。(4)FT-IR、DSC、X-衍射圖譜和TEM照片顯示，納米粒已經(jīng)形成，形成機(jī)理為三聚磷酸根與殼聚糖氨基發(fā)生交聯(lián)，藥物被包裹其中，Lac-NCTD-NPs體外釋放具有良好的緩釋特性。(5)HepG2和SMMC-7721表面的ASGP-R能識別Lac-NCTD上的半乳糖殘基

8、，Lac-NCTD及其納米粒對HepG2和SMMC-7721的毒性比NCTD強(qiáng)，且能被Gal-FBS抑制，NCTD的作用與ASGP-R的識別無關(guān)，它對三種細(xì)胞的毒殺作用不受Gal-FBS的影響。(6)SMMC-7721對Lac-NCTD的攝取實驗結(jié)果進(jìn)一步證實了部分藥物是通過ASGP-R的識別吞噬作用而發(fā)揮抗癌效果的。(7)Lac-NCTD-NPs結(jié)合了藥物的主動靶向性和納米粒自身的被動靶向性，在體內(nèi)被肝細(xì)胞ASGP-R特異性識別，達(dá)到