mir-541及mir-301a對PC12細胞突觸發(fā)育的影響.pdf

1、目的：本研究通過神經(jīng)生長因子誘導PC12細胞突觸發(fā)生，利用生物信息學技術(shù)，結(jié)合細胞培養(yǎng)、miRNA qPCR技術(shù)，以及RNA干擾等技術(shù)，研究與細胞生長分化相關(guān)的gap43和synapsinI基因及其相關(guān)的miRNA在PC12細胞突觸發(fā)生中所發(fā)生的作用，為進一步探明神經(jīng)元突觸發(fā)生中相關(guān)的miRNA的調(diào)控機制提供理論依據(jù)。
　　 方法：(1)常規(guī)體外傳代培養(yǎng)PC12細胞，并用神經(jīng)生長因子誘導使其長出突起。(2)利用qPCR的方法和W

2、estern blot技術(shù)檢測gap43和synapsinI基因誘導前后的變化(3)利用生物信息學技術(shù)預測出與gap43和synapsinI基因相關(guān)的miRNA。(4)利用miRNA qPCR技術(shù)檢測出這些miRNA誘導前后的變化。(5)挑選其變化比較明顯的rno-mir-541和rno-mir-301a構(gòu)建過表達載體和合成干擾片段轉(zhuǎn)染入PC12細胞中，觀測其突觸的變化及其預測基因gap43和synasinI基因的變化。
　　

3、結(jié)果：(1)NGF在50ng/ml的濃度下誘導PC12細胞一周可生長出茂盛的突起。(2)RT-PCR、qPCR、Western blot技術(shù)均顯示PC12細胞誘導后gap43基因和synapsinI基因的表達量較誘導前有所升高。(2)rno-mir-541、rno-mir-540、rno-mir-28與synapsinI基因呈負相關(guān)性。(3)rno-mir-301a、rno-mir-291a-5p、rno-mir-871、rno-mir

4、-742與gap43基因呈負相關(guān)性。(4)rno-mir-541過表達后，synapsinI基因表達下降，突觸長度有顯著性的縮短；rno-mir-541干擾后，synapsinI基因表達有所升高，突觸長度顯著性增長。(5)rno-mir-301a過表達后，gap43基因表達下降，突觸長度有顯著性的縮短；rno-mir-301a干擾后，gap43基因表達有所升高，突觸長度有顯著性的增長。
　　 結(jié)論：(1)gap43基因和syna

5、sinI基因?qū)C12細胞突起的發(fā)育有相關(guān)作用。(2)synapsinI基因與rno-mir-541、rno-mir-540、rno-mir-28具有負相關(guān)性。(3)gap43基因為rno-mir-301a、rno-mir-291a-5p、rno-mir-871、rno-mir-742具有負相關(guān)性。(4)推測synapsinI基因可能為rno-mir-541的一個靶基因，rno-mir-541通過調(diào)控synapsinI基因進而影響到了細