慢性腎衰竭大鼠股骨皮質(zhì)骨及松質(zhì)骨Cbfa1表達(dá)與骨密度間的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　慢性腎臟病礦物質(zhì)和骨代謝紊亂(CKD-MBD)是慢性腎臟病(ChronicRenal Failure，CKD)患者重要并發(fā)癥。腎性骨營養(yǎng)不良是CKD-MBD中骨的異常表現(xiàn)。腎性骨營養(yǎng)不良診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”為骨活檢，但由于其臨床操作復(fù)雜等問題，未被廣泛應(yīng)用。骨的評價(jià)存在較大困難。核心結(jié)合因子-a1(cbfa1)在成骨細(xì)胞發(fā)育、分化和骨形成過程中起著至關(guān)重要的作用，且其表達(dá)的改變可反映腎性骨營養(yǎng)不良的嚴(yán)重程度。本研究通過檢測

2、慢性腎衰竭大鼠模型股骨cbfa1的表達(dá)情況及相應(yīng)部位的骨密度，探討兩者間的關(guān)系，為臨床診斷CKD-MBD中腎性骨營養(yǎng)不良找到更好的評價(jià)指標(biāo)。
　　方法:
　　本研究采用實(shí)驗(yàn)-對照研究方法。
　　1實(shí)驗(yàn)對象:清潔級、健康、雄性SD大鼠;體質(zhì)量為180～200g，共14只;于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院動(dòng)物中心屏障環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對照組、慢性腎衰竭模型組2組。
　　2實(shí)驗(yàn)方法:動(dòng)物模型構(gòu)建:應(yīng)用硫酸腺嘌呤懸

3、濁液灌胃法構(gòu)建慢性腎衰竭大鼠模型，1-3周給予硫酸腺嘌呤懸濁液（硫酸腺嘌呤溶于1.5％甲基纖維素中制成100g/l的懸濁液）6ul/g每天灌胃給藥，4-8周給予1.5％甲基纖維素6ul/g隔日灌胃。正常對照組給予甲基纖維素灌胃給藥，給予1.5％甲基纖維素6ul/g在1-3周每天灌胃，在4-8周隔日灌胃給藥。
　　3標(biāo)本留取及檢測:8周后采用心臟取血法收集大鼠血標(biāo)本檢測其血肌酐、尿素氮、鈣、磷等相關(guān)生化指標(biāo)血清濃度。取左側(cè)股骨，立即

4、將股骨用生理鹽水浸濕的紗布包裹，存入-80℃以下的冰箱中做骨密度試驗(yàn)。測量各組大鼠股骨的整體骨密度（Whole-Bone Mineral Density, W-BMD）、松質(zhì)骨骨密度（Trabecular-Bone Mineral Density, T-BMD）、皮質(zhì)骨骨密度（Cortical-Bone Mineral Density, C-BMD）。取右側(cè)股骨。置入EDTANa2脫鈣液脫鈣，用于免疫組化染色及HE染色，檢測大鼠股骨中C

5、bfa1蛋白的表達(dá)及松質(zhì)骨和皮質(zhì)骨的形態(tài)學(xué)改變。
　　4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析符合雙變量正態(tài)分布作Pearson積差相關(guān)分析，余者采用秩和檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1慢性腎衰竭大鼠模型的構(gòu)建
　　慢性腎衰竭組大鼠血肌酐、尿素氮明顯高于

6、正常對照組組大鼠血清水平(P＜0.05);慢性腎衰竭模型組血清鈣濃度（2.10±0.01 mmol/L）低于正常對照組血清鈣濃度（2.34±0.03 mmol/L），慢性腎衰竭模型組血清磷濃度（2.21±0.03 mmol/L）高于正常對照組血清磷濃度（1.75±0.07 mmol/L），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。慢性腎衰竭組大鼠腎臟HE染色亦符合慢性腎衰竭改變;慢性腎衰竭大鼠股骨HE染色:慢性腎衰竭模型組與正常對照組相比:

7、小梁數(shù)增多，而脂肪空泡數(shù)減少，且皮質(zhì)厚度變薄
　　2慢性腎衰竭大鼠股骨骨皮質(zhì)骨及松質(zhì)骨Cbfa1表達(dá)的改變
　　慢性腎衰竭模型組股骨松質(zhì)骨Cbfa1表達(dá)（0.01539±0.00016meD）多于正常對照組股骨松質(zhì)骨Cbfa1表達(dá)（0.01075±0.00026meD），慢性腎衰竭模型組股骨皮質(zhì)骨Cbfa1表達(dá)(0.00367±0.00022meD)少于正常對照組股骨皮質(zhì)骨Cbfa1表達(dá)（0.01143±0.00078meD

8、）。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　3慢性腎衰竭大鼠股骨皮質(zhì)骨及松質(zhì)骨骨密度的改變
　　慢性腎衰竭模型組W-BMD（0.1405±0.0016 g/cm2）低于正常對照組W-BMD（0.1571±0.0019 g/cm2），慢性腎衰竭模型組C-BMD(0.1314±.0028g/cm2)低于正常對照組C-BMD(0.1550±.0057 g/cm2)，慢性腎衰竭模型組T-BMD（0.1662±0.0013 g/c

9、m2）高于正常對照組T-BMD(0.1583±0.0024g/cm2)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　4慢性腎衰竭大鼠股骨皮質(zhì)骨及松質(zhì)骨Cbfa1表達(dá)與骨密度及生化指標(biāo)的關(guān)系
　　慢性腎衰竭大鼠股骨皮質(zhì)骨骨密度與皮質(zhì)骨Cbfa1蛋白表達(dá)做相關(guān)分析呈正相關(guān)（r=0.805，P＜0.001），慢性腎衰竭大鼠股骨松質(zhì)骨骨密度與松質(zhì)骨Cbfa1蛋白表達(dá)做相關(guān)分析呈正相關(guān)(r=0.844，P＜0.001)。慢性腎衰竭大鼠