低氧預(yù)處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)慢性腎衰竭大鼠腎臟的修復(fù)作用.pdf

1、目的：
　　探討低氧預(yù)處理的骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)5/6腎切除大鼠腎損傷的修復(fù)作用。
　　方法：
　　1、采用密度梯度離心法分離SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSC），倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長過程，流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定，取第3-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。采用混合氣體缺氧小室（1％O2+5%CO2+94%N2）低氧預(yù)處理（

2、hypoxic preconditioning，HP）BMSC建立實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。?shí)驗(yàn)分為3組：正常培養(yǎng)BMSC（對(duì)照組）、低氧預(yù)處理24h組（低氧24h組）、低氧預(yù)處理48h（低氧48h組），通過流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI檢測(cè)低氧預(yù)處理后各組細(xì)胞的凋亡情況；反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和蛋白免疫印跡雜交（Western blot,WB）檢測(cè)各組細(xì)胞HIF-1α、CXCR4、VEGF的表達(dá)情況；比較各組細(xì)胞抗凋亡能力

3、和細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　2、采用分階段5/6腎切除術(shù)建立大鼠慢性腎衰竭模型，將動(dòng)物隨機(jī)分為四組：Sham組（假手術(shù)組），Model組（5/6腎切除組），BMSC組（常氧培養(yǎng)BMSC移植組)，hp-BMSC組（低氧預(yù)處理24h BMSC移植組），各組于5/6腎切除術(shù)后一周后分別經(jīng)陰莖背靜脈注射PBS、PBS、BMSC、hp-BMSC細(xì)胞懸液。于注射后1周、3周、6周處死各組大鼠，留取血清和腎組織，檢測(cè)血清尿素氮（BUN）和肌酐（SC

4、r），并觀察腎臟病理變化。同時(shí)，以Dio綠熒光染料體外標(biāo)記BMSC，比較常氧培養(yǎng)BMSC和缺氧預(yù)處理BMSC移植后向腎臟歸巢的數(shù)量差異。
　　結(jié)果：
　　1、原代細(xì)胞呈短梭形、橢圓形，貼壁集落生長，經(jīng)3次傳代后，細(xì)胞大小及形態(tài)趨于一致，細(xì)胞呈長梭形或放射狀生長。流式細(xì)胞術(shù)顯示對(duì)照組細(xì)胞早期和晚期均未見凋，與常規(guī)培養(yǎng)（對(duì)照組）組細(xì)胞比較，低氧預(yù)處理24h（低氧24h）組細(xì)胞早期和晚期凋亡率無明顯差別，隨著細(xì)胞缺氧時(shí)間的延長，低

5、氧預(yù)處理48h（低氧48h）組的早期凋亡、晚期凋亡和總凋亡數(shù)量均顯著增多（P<0.05）；RT-PCR及WB顯示，與對(duì)照組和低氧48h組相比，低氧24h組HIF-lα、CXCR4、VEGF的表達(dá)明顯增高（P<0.05），而對(duì)照組組和低氧48h組比較，HIF-lα、CXCR4、VEGF的表達(dá)未見明顯差別。
　　2、在各時(shí)間點(diǎn)，Model組大鼠BUN、Scr水平均高于Sham組（P<0.05）；BMSC組和hp-BMSC組BUN、Sc

6、r水平均較Model組降低（P<0.05）；與BMSC組比較，hp-BMSC組BUN和Scr在第6周降低更顯著（P<0.05）。熒光定位顯示在hp-BMSC組存活的BMSC明顯多于BMSC組。細(xì)胞移植后，兩組大鼠腎臟病理損傷均較Model組減輕，而hp-BMSC組較BMSC組治療效果更明顯。
　　結(jié)論：
　　低氧預(yù)處理的BMSC可提高BMSC抗凋亡能力，并可促進(jìn)BMSC向受損腎臟組織遷移歸巢、延長細(xì)胞在腎臟內(nèi)的定植時(shí)間，更有