肝X受體通過線粒體通路調(diào)控高糖誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的:
　　1、觀察高糖環(huán)境中H9C2細(xì)胞活性及凋亡的改變。
　　2、探討肝X受體通過線粒體途徑在調(diào)控H9C2細(xì)胞凋亡過程中的作用。
　　方法:
　　1.以H9C2細(xì)胞為研究對(duì)象,分為低糖組(Control組)、甘露醇組、高糖組、高糖+T0901317組及高糖+5CPPSS-50組。
　　2.CCK-8法檢測(cè)各組H9C2細(xì)胞的活性;DCFH-DA法分別檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)活性氧水平;羅丹明123熒光染色觀察各組細(xì)

2、胞線粒體膜電位變化;qRT-PCR法分別檢測(cè)Bax、Bcl-2 mRNA的表達(dá);Western blot檢測(cè)Cleaved Caspase3蛋白的表達(dá);Annexin V-FITC法分別檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果:
　　1.CCK-8檢測(cè)各組H9C2細(xì)胞活性結(jié)果:與Control相比,高糖組、T0901317組、5CPPSS-50組細(xì)胞活性均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而甘露醇組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05

3、)。與高糖組相比,高糖+T0901317組細(xì)胞活性增高,高糖+5CPPSS-50組細(xì)胞活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.DCFH-DA法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)活性氧水平結(jié)果:與Control組相比高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組活性氧水平均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),甘露醇組差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與高糖組相比,高糖+T0901317組活性氧水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義(P<0.05),高糖+5CPPSS-50組活性氧水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.羅丹明123熒光染色觀察線粒體膜電位結(jié)果:與Control組相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組熒光強(qiáng)度均降低,甘露醇組無明顯差異;與高糖組相比,高糖+T0901317組熒光強(qiáng)度升高,高糖+5CPPSS-50組熒光強(qiáng)度減弱。
　　4.qRT-PCR檢測(cè)Bax、Bcl-2 mRNA表達(dá)結(jié)果:與

5、Control組相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組Bax mRNA的表達(dá)均上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),甘露醇組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但與高糖組相比高糖+T0901317組的表達(dá)顯著下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);高糖+5CPPSS-50組表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.01)。與Control相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組Bcl-2

6、 mRNA的表達(dá)均明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),甘露醇組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同時(shí)與高糖組相比,高糖+T0901317組表達(dá)水平上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.01),而高糖+5CPPSS-50組表達(dá)水平下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.Western blot檢測(cè)Cleaved Caspase3蛋白的表達(dá)結(jié)果:與Control組相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS

7、-50組蛋白表達(dá)水平上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),甘露醇組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而與高糖組相比,高糖+T0901317組蛋白表達(dá)水平下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.01),高糖+5CPPSS-50組蛋白表達(dá)水平上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　6.Annexin V-FITC法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率結(jié)果:與Control組相比,高糖組、高糖+T0901317組、高糖+5CPPSS-50組凋亡率均上升

8、,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),甘露醇組凋亡率無明顯改變,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與高糖組相比,高糖+T0901317組凋亡率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),高糖+5CPPSS-50組凋亡率上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.LXRs激動(dòng)劑T0901317可改善高糖環(huán)境中H9C2細(xì)胞活性,抑制細(xì)胞凋亡,對(duì)細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用;抑制LXRs后,對(duì)高糖環(huán)境中H9C2細(xì)胞損傷作用更