骨髓間充質(zhì)干細胞對百草枯所致大鼠肺纖維化治療的研究.pdf

1、本文主要分兩部分展開敘述：
　　第一部分：SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離、培養(yǎng)、純化及其生物學特性鑒定的研究
　　目的：探討SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone Marrow-derived Mesenchymal Sstem Cells，BMSCs）體外分離、純化和培養(yǎng)方法，并鑒定其生物學特性，建立理想的大鼠BMSCs體外分離培養(yǎng)體系，為BMSCs實驗研究應用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：取4-6周齡的清潔級雄性SD大鼠，無菌條

2、件下分離大鼠下肢，PBS沖洗骨髓腔，收集骨髓。聯(lián)合運用密度梯度離心法和全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離、純化和培養(yǎng)SD大鼠BMSCs。光鏡下進行細胞形態(tài)學觀察、采用MTT法繪制細胞生長曲線、應用流式細胞術(shù)測定細胞表面標記，并檢測BMSCs向成骨、成脂肪細胞分化的潛能。
　　結(jié)果：顯微鏡下體外分離培養(yǎng)的SD大鼠BMSCs呈梭形、成纖維細胞樣形態(tài)，大小均一，漩渦狀生長。細胞生長曲線呈“S”形。P3代SD大鼠BMSCs純度達98％以上；細胞表面表達

3、CD44、CD90等抗原分子，不表達CD34抗原。誘導P3代BMSCs可向成骨細胞及成脂肪細胞分化。
　　結(jié)論：本實驗建立起了一種理想的大鼠BMSCs體外分離培養(yǎng)體系。根據(jù)這種方法培養(yǎng)出的大鼠BMSCs純度高、生物學特征穩(wěn)定，可用于對BMSCs的實驗研究。
　　第二部分：BMSCs對百草枯所致大鼠肺纖維化治療的研究
　　目的：觀察BMSCs在百草枯致大鼠肺纖維化的療效，為臨床百草枯中毒的患者治療提供新的思路。
　

4、　方法：90只雌性SD大鼠隨機分為3組（各30只），為A組（正常對照組）、B組（PQ組）、C組（PQ+BMSCs組）。后兩組每只大鼠均腹腔注射百草枯溶液15 mg/k g（無菌蒸餾水稀釋至1%濃度）。C組于染毒后3h、第3、7天分別行尾靜脈移植2×106個/只的雄性SD大鼠BMSC懸液1.5 ml。觀察大鼠存活率，并于染毒后14天、21天、28天每組隨機選取6只大鼠處死，留取血液與肺組織標本。測定肺濕/干（W/D）比值，檢測血清TGF-

5、β、肺HYP的含量；觀察肺組織病理變化；天狼星紅染色肺組織進行肺纖維化程度的觀察并定量分析。
　　結(jié)果：百草枯造模后，14天內(nèi)B組大鼠死亡總共14只，C組死亡4只大鼠。B組與C組的存活率比較有顯著差別（P＜0.05）。取B組肺組織行HE、MASON染色，病理符合肺纖維；在觀察的第14、21和28天， C組比B組出現(xiàn)肺泡炎癥、肺纖維化程度和肺臟結(jié)構(gòu)破壞更輕。天狼星紅染色B組Ⅰ型膠原較A組和C組明顯增多，C組較A組增多。C組肺W/D比

6、較B組顯著減輕（P＜0.05）；A組與C組肺W/D比值無差別（P=0.315，P＞0.05）。第14、21、28天血清中表達轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）的含量比較中，B組比C組明顯增多（P<0.05）；組間差異有顯著性。第28天C組較B組肺HYP含量降低（P＜0.05），兩組肺HYP含量較A組均升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細胞移植對百草枯誘導大鼠肺纖維化模型的肺纖維化程度具有一定的抑制作用，可提高生存率，可能與其