元寶楓葉片花色苷相關(guān)基因克隆與序列分析.pdf

1、元寶楓（Acer truncatum）是槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer)的多年生落葉喬木，具有豐富多彩的獨(dú)特葉色，是一種重要的觀葉植物。其翅果扁平，形狀像中國古代金錠“元寶”而得名。單葉對生，掌狀五裂（少數(shù)3裂），在春季嫩枝嫩葉多為紅色，入秋后葉片又變成紅色或黃色，色彩艷麗，觀賞價(jià)值極佳，在園林綠化中被廣泛應(yīng)用，如今備受關(guān)注。目前人們對元寶楓葉色形成的分子機(jī)理的研究相當(dāng)缺乏，未見任何關(guān)于元寶楓葉色形成相關(guān)基因的克隆和序列分

2、析的報(bào)道。這極大的限制了以元寶楓為代表的彩葉植物的分子育種和葉色基因工程的開展?；ㄉ剀諏Σ嗜~植物葉色多彩的形成起主要作用，本研究從元寶楓的紅葉新品系1-6號的葉片中克隆了花色素苷生物合成的幾個(gè)相關(guān)基因，并對基因序列進(jìn)行分析，以便探討對元寶楓葉片花色素苷生物合成途徑的分子調(diào)控機(jī)理，主要結(jié)果如下:
　　1、為獲取高質(zhì)量的元寶楓葉片總RNA，通過比較分析發(fā)現(xiàn)改良CTAB法更適于元寶楓葉片總RNA的提取。
　　2、采用RT-PCR

3、和RACE-PCR的方法，從元寶楓葉片中首次成功克隆了調(diào)控花色素苷表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子WD40基因的全長cDNA序列，該基因全長1356bp，編碼337個(gè)氨基酸。在NCBI中BLAST，發(fā)現(xiàn)獲得的WD40基因的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列與其他物種的結(jié)構(gòu)基因有較高的同源性，與血紅雞爪槭WD40相似性很高，并且推斷該基因?yàn)樵獙殫鞯腤D40轉(zhuǎn)錄因子。該基因名為AtrWD40，在Genbank已注冊，登錄號為KX289886。
　　3、采用R

4、T-PCR方法，從元寶楓葉片中首次克隆了查爾酮合成酶基因CHS的全長cDNA序列，該基因全長1365 bp，編碼365個(gè)氨基酸，具有CHS基因的典型結(jié)構(gòu)特征。NCBI中BLAST分析表明，CHS基因編碼蛋白序列與許多己注冊的植物CHS蛋白具有很高的相似性，所獲得的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列與其他物種的結(jié)構(gòu)基因CHS有較高的同源性，所得片段包含結(jié)構(gòu)域CHS-Like(cd00831)，推斷該基因?yàn)樵獙殫鞯腃HS結(jié)構(gòu)基因。該基因名為Atr