

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、禽大腸桿菌病(avian colibacillosios)是由禽致病性大腸埃希氏菌(APEC)感染禽類引起的多種臨床病型的總稱。主要表現(xiàn)有胚胎和幼雛的死亡、敗血癥、氣囊炎、心包炎、輸卵管炎、腸炎、腹膜炎和大腸桿菌性肉芽腫等。病原性大腸埃希氏菌(E.coli)血清型眾多,抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜,給防治本病帶來了困難,因此,尋求針對主要致病大腸桿菌免疫保護譜廣的抗原物質(zhì),并模擬其自然感染的黏膜免疫,對該病的特異性免疫防治具有重要的實踐意義。
2、 為得到引發(fā)黏膜免疫并傳遞特異性抗原物質(zhì)的活菌載體,本實驗從健康雞腸道分離乳酸桿菌進行鑒定,并對其對于腸道的粘附能力和耐藥性進行了檢測。通過形態(tài)、培養(yǎng)、生化特性鑒定以及16s rRNA鑒定,共獲得了8株乳酸桿菌,其中包括3株Lactobacillus crispatus(卷曲乳桿菌)、2株Lactobacillus johnsonii(約氏乳桿菌)、2株Lactobacillus salivarius(唾液乳桿菌)和1株Lactobac
3、illus saerimneri。8株乳酸桿菌在37℃和42℃均能良好生長;抑菌試驗表明,對革蘭氏陽性及陰性細菌均有一定的抑菌活性。體外粘附實驗表明,8株乳酸桿菌均具有一定的粘附特性,可在腸道內(nèi)定殖??股孛舾行詫嶒灡砻?株乳酸桿菌對多種抗生素敏感。
在特異性抗原物質(zhì)的制備上,選用APEC O1血清型的Ⅰ型菌毛A(FimA)和外膜蛋白C(OmpC)作為靶抗原基因片段,以APEC基因組為模板,A1和A2為引物,經(jīng)PCR擴增5'端
4、帶有ApalⅠ酶切位點和linker序列,3'端帶有ApaⅠ酶切位點的528bp的基因片斷FimA。以C1、C2為引物,擴增5'端帶有SacⅠ酶切位點和Flag標簽序列,3'端帶有ApalⅠ酶切位點的1074bp的基因片段OmpC。再將FimA和OmpC與T載體進行亞克隆連接構(gòu)建,獲得二者基因融合的重組質(zhì)粒pMD18-T-OmpC-fimA,構(gòu)建了Ⅰ型菌毛A(FimA)和外膜蛋白C(OmpC)的融合基因片段。
利用限制性內(nèi)切酶
5、SacⅠ和ApaⅠ將融合基因片段酶切后定向插入含有HCE組成型強啟動子并具有錨定結(jié)構(gòu)序列(Anchor)的乳酸菌組成型表面表達載體pPG-T7g10-PPT中,并將重組質(zhì)粒pPG-T7g10-PPT-OmpC-FimA電轉(zhuǎn)化入工程菌干酪乳桿菌Lactobacillus casei393和雞腸道分離的乳酸桿菌M-11(Lactobacillus saerimneri)中,構(gòu)建獲得了兩株重組菌pPG-T7g10-PPT-OmpC-FimA/
6、L393和pPG-T7g10-PPT-OmpC-FimA/M-11。Western blot檢測結(jié)果表明融合基因在兩株乳酸桿菌中均獲得了表達,出現(xiàn)了約101KDa的特異性反應(yīng)帶。重組乳酸桿菌在雞腸道內(nèi)定殖特性分析結(jié)果表明,飼喂重組菌可以使肉仔雞的日增重明顯增加,與對照組相比差異顯著;模擬腸道環(huán)境中,重組菌可耐受pH=3的酸性環(huán)境,在0.1%的膽汁酸鹽環(huán)境中可良好生長;重組菌可在雞腸道內(nèi)定殖,在免疫后的14天,重組菌的數(shù)量趨于穩(wěn)定,一直持
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 尿道致病性大腸桿菌fimA基因的克隆與表達.pdf
- 雞致病性大腸桿菌菌毛免疫原性及其FimA和FimH基因的研究.pdf
- 復(fù)方中草藥超微粉防治雞致病性大腸桿菌病的研究.pdf
- 雞致病性大腸桿菌基因工程菌株的構(gòu)建及其免疫原性的研究.pdf
- 融合蛋白IFN-IgGFc在乳酸桿菌和大腸桿菌中的表達及其生物學活性研究.pdf
- 雞大腸桿菌病
- 融合表達禽致病性大腸桿菌fima-ompC基因及微皺褶細胞和樹突狀細胞靶向肽重組乳酸菌的鑒定及免疫學評價.pdf
- 雞致病性大腸桿菌耐藥性監(jiān)測及基因型研究.pdf
- 吉林城區(qū)雞致病性大腸桿菌的分離鑒定及滅活疫苗研制.pdf
- 濟寧地區(qū)雞源致病性大腸桿菌分離鑒定與耐藥性分析.pdf
- 雞大腸桿菌病的流行與防治
- 大腸桿菌、乳酸桿菌“活的非可培養(yǎng)狀態(tài)”研究.pdf
- 過量乳酸桿菌在小鼠生殖道的致病性研究.pdf
- 腸致病性大腸桿菌eae基因的克隆及其原核表達.pdf
- 雞消化道乳酸桿菌的黏附研究.pdf
- 腸致病性大腸桿菌045 ler基因缺失突變菌株的構(gòu)建及其特性的研究.pdf
- 禽致病性大腸桿菌PhoP-Q蛋白的表達純化及其毒力調(diào)控分析.pdf
- 雞致病性大腸桿菌的藥敏試驗、血清型鑒定及耐藥基因的PCR檢測.pdf
- 禽病原性大腸桿菌與尿道致病性大腸桿菌相關(guān)鐵攝取系統(tǒng)與調(diào)控蛋白RfaH及莢膜致病作用的研究.pdf
- 外膜蛋白T在尿路致病性大腸桿菌致病機理中的作用的初步研究.pdf
評論
0/150
提交評論